Получение и очистка рекомбинантного домена III альфа-фетопротеина человека

Аннотация:

Ранее была продемонстрирована возможность использования рекомбинантного альфа-фетопротеина или его рецепторсвязывающего домена, несущего на С-конце 6-гистидиновый тег (рАФИЗД-His6), в качестве векторов для адресной доставки противоопухолевых агентов. Эти рекомбинантные белки содержат нежелательную для дальнейших доклинических испытаний последовательность из шести остатков гистидина, в связи с чем появилась необходимость в получении рекомбинантного белка рАФПЗД без этой аффинной метки с последующей оценкой его функциональной активности. Белок продуцировался в штамме Escherichia coli BL21 (DE3) в виде телец включения. Подобраны оптимальные условия отмывки телец включения и рефолдинга целевого белка. Первичную очистку продукта проводили высаливанием примесных белков с использованием насыщенного раствора (NH4)2SO4. На второй стадии очистки проводили гидрофобную хроматографию на колонке с бутил-целлюлозой. Аутентичность структуры подтверждена методом тандемной масс-спектрометрии, а также анализом мотивов вторичной структуры методом кругового дихроизма. Флуоресцентно меченный белок рАФПЗД активно проникал в опухолевые клетки линии MCF7. На основании полученных данных можно сделать вывод о возможности применения рАФПЗД для адресной доставки лекарственных средств.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2021
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2021.-N 4.-С.32-42. Библ. 24 назв.
Просмотров: 18