Рекомбинантные штаммы-продуценты термостабильной липазы из Thermomyces lanuginosus и их применение в гетерогенном биокатализе, в том числе, в процессах низкотемпературного синтеза сложных эфиров

Аннотация:

Данная работа посвящена конструированию рекомбинантных штаммов Escherichia coli BL21(DE3) и Pichia pastoris X-33, продуцирующих 1,3-специфичную термостабильную липазу из Thermomyces lanuginosus. Последовательности двух генов липазы были оптимизированы для экспрессии в бактериях и метилотрофных дрожжах, затем синтезированы и клонированы в составе соответствующих экспрессионных векторов. В результате генно-инженерных манипуляций были сконструированы штаммы Е. coli и P. pastoris, эффективно продуцирующие рекомбинантную липазу из Т. lanuginosus. Клоны rE.coli синтезировали липазу, накапливающуюся в цитоплазме в количестве 30—40% от суммарного клеточного белка. Клоны дрожжей P. pastoris секретировали липазу в питательную среду в концентрации не ниже 1 г/л. Рекомбинантные липазы, продуцируемые бактериями Е. coli и дрожжами P. pastoris, обозначенные, как rE.coli/lip и rPichia/Mp, соответственно, содержащие в С-концевой области шестигистидиновую последовательность (-His6), были иммобилизованы на/в твердых неорганических носителях с целью разработки гетерогенных биокатализаторов (БК) для процессов ферментативной конверсии триглицеридов и жирных кислот. Липаза rPichia/lip была адсорбирована на мезопористом силикагеле и макропористом углеродном аэрогеле. Свойства приготовленных БК, их ферментативная активность, субстратная специфичность и операционная стабильность, были изучены в реакции этерификации жирных кислот с алифатическими спиртами в средах органических растворителей при 20±2°С. Было показано, что БК обладали сравнительно широкой субстратной специфичностью, а также высокой операционной стабильностью и практически полностью сохраняли высокую этерифицирующую активность в течение нескольких десятков реакционных циклов.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2021
Объем: 15с.
Дополнительная информация: 2021.-N 5.-С.5-19. Библ. 35 назв.
Просмотров: 17