Разработка продуцента рекомбинантного химозина марала на основе дрожжей Kluyveromyces lactis

Аннотация:

Разработан плазмидный вектор pSVB-Cer, позволяющий интегрировать экспрессионную кассету, содержащую ген прохимозина марала, в геном коммерческого штамма GG799 дрожжей Kluyveromyces lactis. Контролируемая экспрессия гена прохимозина марала в рекомбинантном продуценте достигалась использованием гибридного автоиндуцибельного промотора Р350, который активируется при отсутствии в культуральной среде глюкозы. Промотор Р350 включал в себя 3' фрагмент коровой последовательности промотора глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы (GAP1) и 5' фрагмент регуляторной последовательности промотора изоцитрат лиазы (ICL1). В качестве селективного маркера, в вектор pSVB-Cer включали ген ацетамидазы (amdS), контролируемый промотором гена алкогольдегидрогеназы (ADH1). Получены клоны продуцента, обеспечивающие накопление в культуральной среде рекомбинантного прохимозина марала. Установлено влияние исходных концентраций глюкозы, температуры, продолжительности культивирования, солей фосфорной кислоты и витамина группы В, на уровень накопления целевого профермента в культуральной жидкости. Максимальный выход рекомбинантного химозина марала с активностью 152 УЕ/мл был получен при культивировании штамма-продуцента в течение 114 часов при 22°С, в среде, содержащей 3% глюкозы, 0,75 г/л гидрофосфата калия и 4,5 мг/л пантотената кальция.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2021
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2021.-N 5.-С.20-27. Библ. 29 назв.
Просмотров: 23