ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ Cdk5 ФОСФОРИЛИРОВАТЬ ДЕУБИКВИТИНИРУЮЩИЙ ФЕРМЕНТ BRCC3 IN VITRO

Аннотация:

При болезни Паркинсона повышены как экспрессия деубиквитинирующего фермента BRCC3 (ВRСА1-ВRСА2-содержащая комплексная субъединица), так и уровень Cdk5 (циклинзависимая протеинкиназа 5), участвующие в нейровоспалительном ответе. Регуляторный механизм Cdk5 в посттрансляционной модификации BRCC3 остаётся неясным. В данном исследовании выясняли, способна ли Cdk5 фосфорилировать BRCC3. Сайты фосфорилирования BRCC3 киназой Cdk5 были предсказаны с помощью программы GPS 5.0. Плазмиду His-BRCC3 конструировали путём клонирования гена BRCC3 в вектор pGEX-6P-1, после чего продукцию рекомбинантного белка His-BRCC3 индуцировали изопропил-бетаD-1-тиогалактопиранозидом. Белок His-BRCC3 выделяли с помощью аффинной хроматографии на His-Tag агарозе. Его сайты фосфорилирования также определяли с помощью программы GPS 5.0. Фосфорилирование рекомбинантного белка His-BRCC3 киназой Cdk5 in vitro детектировали масс-спектрометрией и вестерн-блоттингом. Показано, что Cdk5 может фосфорилировать деубиквитинирующий фермент BRCC3 in vitro, что может оказаться полезным для дальнейшего изучения механизма нейродегенерации.

Авторы:

Издание: Бюллетень экспериментальной биологии и медицины
Год издания: 2021
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2021.-N 12.-С.698-706. Библ. 15 назв.
Просмотров: 18