ПРИМЕНЕНИЕ КОНДИЦИОНИРОВАННОЙ СРЕДЫ ОТ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК В ПРОТОКОЛЕ ПО ПОЛУЧЕНИЮ МЕГАКАРИОЦИТОВ И ТРОМБОЦИТОВ EX VIVO

Аннотация:

Интерес представляет использование кондиционированной среды от мезенхимальных стромальных клеток (МСК) с целью увеличения экспансии CD34+ гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Цель — анализ эффективности двух методов получения мегакариоцитов и тромбоцитов человека ex vivo из CD34+ ГСК пуповинной крови с использованием кондиционированной среды от мезенхимальных стромальных клеток и среды IMDM. Методы. Сравнивали два метода культивирования, отличающиеся формулировкой питательных сред. Для контроля экспрессии поверхностных антигенов использовали тромбоциты периферической крови здоровых доноров. CD34+ ГСК были выделены из мононуклеарной фракции клеток пуповинной крови методом иммуномагнитной селекции. Полученные клетки вносили в концентрации 1х10 в 4 кл/мл в 24-луночные планшеты и культивировали при 39°С и 10% СО2 в течение первых 7 сут., после чего условия меняли на 37°С и 5% С02 и культивировали 14 сут. В первой группе до 7-х сут. культивирование проводили на кондиционированной МСК среде, содержащей тромбопоэтин (30 нг/мл), фактор стволовых клеток (2 нг/мл), интерлейкин (ИЛ)-6 (7,5 нг/мл) и ИЛ-9 (13,5 нг/мл), а во второй группе использовали среду IMDM с аналогичным цитокиновым коктейлем. По окончании культивирования проводили подсчет клеток на гемоцитометре. Определение экспрессии CD34, CD41a, CD42b проводили с помощью проточной цитометрии. Результаты. Образование мегакариоцитов наблюдали на 7-е сут. культивирования. Уровень экспрессии с использованием кондиционированной среды от мезенхимальных стромальных клеток (1-я группа) по CD41a составил 5,84±0,33% против 10,43±1,08% с применением среды IMDM (2-я группа). К 13-м суткам отношение увеличилось до 42,05±1,71 и 61,78±1,71 % соответственно. CD41a+ мегакариоциты 1-й группы экспрессировали маркер CD42b на уровне 96,85±1,06%, против 88,7±0,56% во 2-й группе. Среднее количество ядросодержащих клеток на 11-е сутки было достоверно больше при культивировании в кондиционированной МСК среде и составило 326,02±1,86х10 в 4 кл/мл против 197,26±10,55х10 в 4 кл/мл при использовании IMDM. Образование протромбоцитов было заметно с помощью микроскопии уже с 12-х суток. Соотношение CD41a+/CD42b+ тромбоцитов составляло 59,5±3,85% в 1-й группе, против 65,9±8,72% во 2-й группе, при этом уровень экспрессии маркера в контрольных тромбоцитах венозной крови составил 96,11±0,89%. Заключение. Использование кондиционированной МСК среды увеличивает экспансию ядросодержащих клеток, однако уменьшает степень дифференцировки в мегакариоцитарную линию.

Авторы:

Издание: Гематология и трансфузиология
Год издания: 2021
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2021.-N 4.-С.526-538. Библ. 38 назв.
Просмотров: 15