Оптимизация условий хранения РНК в биобанке, а также методов ручного и автоматизированного выделения РНК из цельной крови и лейкоцитарной фракции

Аннотация:

Цель. Оптимизация методики выделения и хранения рибонуклеиновой кислоты (РНК) из цельной крови и лейкоцитарной фракции. Материалы и методы. Сравнение качества выделения проводилось для образцов РНК, полученных из 228 образцов лейкоцитарной фракции и 198 образцов цельной крови. Выделение было проведено из свежих и замороженных образцов с помощью реагента ExtractRNA™ и автоматизированной станции MagNA Pure Compact. Были опробованы различные способы удаления эритроцитов — с помощью центрифугирования и обработки гемолитиками двух производителей, а также способы заморозки материала для последующего выделения РНК — с консервантами и без них. Результаты. Была проверена 21 комбинация условий. Наиболее качественная РНК выделялась при ручной экстракции с использованием реагента ExtractRNA™ из свежей, очищенной гемолитиком "Амплисенс" лейкоцитарной фракции (успешность выделения — 94%, медиана RIN=8,4); замороженной в IntactRNA™, очищенной центрифугированием лейкоцитарной фракции (успешность выделения — 100%, медиана RIN =8); замороженной в ExtractRNA™, очищенной центрифугированием лейкоцитарной фракции (успешность выделения — 100%, медиана RIN =9,3). Заключение. Из замороженных фракций крови возможно выделение РНК, не уступающей по качеству выделенной из свежих образцов. Таким образом, проводить выделение РНК сразу после поступления биологического материала не обязательно.

Авторы:

Издание: Кардиоваскулярная терапия и профилактика
Год издания: 2021
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2021.-N 8(2).-С.217-224. Библ. 26 назв.
Просмотров: 22