МУТАЦИИ В СУБЪЕДИНИЦЕ Сох12 ДРОЖЖЕЙ СНИЖАЮТ АКТИВНОСТЬ МИТОХОНДРИАЛЬНОГО КОМПЛЕКСА IV

Аннотация:

Цитохром с-оксидаза 6В1 (СОХ6В1) является одной из наименее изученных субъединиц комплекса IV (CIV) митохондриальной электрон-транспортной цепи. В настоящей работе мы изучали патобиохимические и респираторные функции Сох12 (дрожжевой ортолог СОХ6В1 человека) с использованием клеток Saccharomyces cerevisiae BY4741 (сох12А), дефицитных по белку Сох12. Эти клетки показывали серьёзные затруднения в росте в аэробной (дыхательной) среде, содержащей глицерин и этанол, которые можно было восстановить путём комплементации с генами СОХ12 дрожжей или СОХ6В1 человека. Сох12 с остатком аргинина 17, замещённым гистидином (R17H) или пистеином (R17C) (мутации, аналогичные тем, которые наблюдаются у людей), не вызывал восполнение утраченной функции Сох12. Когда клетки сох12дельта выращивали в богатой дыхательной/ферментативной среде галактозы, изменений в экспрессии субъединиц дыхательной цепи не наблюдалось. Анализ с помощью метода голубого нативного электрофореза в полиакриламидном геле с последующим вестерн-блоттингом с использованием антител против Rip1 и Cox1, которые являются специфическими компонентами комплексов III (CIII) и IV (CIV) соответственно, не выявил заметного снижения содержания нативных суперкомплексов (SC) CIII2CIV2 и CIII2CIV1. Однако ассоциация фактора 2 респираторного суперкомплекса Rcf2 и субъединицы Сох2 с SC в клетках сох12дельта понижалась, а специфическая активность CIV снижалась на 90%. Как базальное дыхание, так и стимулированное сукцинатом/АДФ дыхание в состоянии 3, а также мембранный потенциал митохондрий в клетках сох12А были понижены. Кроме того, клетки сох12дельта и клетки, синтезирующие мутантные формы белка Сох12 (R17H и R17C), показывали большую чувствительность к окислительному стрессу, индуцированному Н202, по сравнению с клетками дикого типа (WT). Моделирование in silico структуры SC дрожжей WT показало, что Сох12 формирует сеть взаимодействий с Rcf2 и Сох2. В целом полученные нами результаты говорят о том, что Сох12 необходим для проявления активности CIV.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2022
Объем: 19с.
Дополнительная информация: 2022.-N 1.-С.26-44. Библ. 47 назв.
Просмотров: 17