Применение ВЭЖХ-масс-спектрометрии для количественного анализа нейроактивных аминокислот в гомогенатах головного мозга крыс после дериватизации с 9-флуоренилметилхлорформиатом

Аннотация:

Важной составляющей механизма действия психотропных лекарственных средств является их влияние на обмен нейроактивных аминокислот. Изменение содержания аминокислот в структурах головного мозга крыс может выступать в роли фармакодинамического маркера, а также диагностического признака при изучении патогенеза заболеваний центральной нервной системы. Цель исследования - разработка ВЭЖХ-МС/МС методики количественного определения нейроактивных аминокислот в гомогенатах головного мозга крыс после дериватизации с 9-флуоренилметилхлорформиатом. Исследовали гомогенат мозговой ткани крыс. Выделение аминокислот из мозга крыс осуществляли с помощью гомогенизатора Поттера-Эльвейема. Депротеинизацию и дериватизацию проводили путем добавления к образцам раствора 9-флуоренилметилхлорформиата в ацетонитриле. Детектирование производных аминокислот выполняли с помощью массспектрометра Sciex 3200, для хроматографического разделения использовали ВЭЖХ Agilent 1260 Infinity II. Элюирование осуществляли смесью ацетонитрила и воды в градиентном режиме. В результате пробоподготовка представляла собой смешивание 100 мкл гомогената мозговой ткани крыс, 100 мкл боратного буфера, 20 мкл 1 мМ раствора норвалина и 250 мкл 12 мМ раствора Fmoc-CI в ацетонитриле с последующим центрифугированием в течение 10 мин. Для разделения Fmoc-производных аминокислот использовали хроматографическую колонку InfinityLab Poroshell 120 ЕС-С18 4,6x100 мм, 2,7 мкм. Общее время хроматографического анализа - 10 мин, время удерживания Fmocпроизводных глицина, ГАМК, аспарагиновой и глутаминовой кислот, аспарагина и глутамина - 6,7; 6,8; 6,4; 6,4; 6,2 и 6,1 мин соответственно. Аналитический диапазон методики для каждой аминокислоты составил от 0,05 до 50 нмоль в 1 мл гомогената. Апробация методики была произведена путем анализа содержания аминокислот в головном мозге шести интактных крыс Wistar. Заключение. Разработана хромато-масс-спектрометрическая методика количественного определения глутамина, аспарагина, глицина, ГАМК, глутаминовой и аспарагиновой кислоты в гомогенатах головного мозга крыс. Для повышения чувствительности анализа была проведена предколоночная дериватизация аминокислот с 9-флуоренилметилхлорформиатом.

Авторы:

Издание: Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Год издания: 2022
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2022.-N 5.-С.35-45. Библ. 14 назв.
Просмотров: 16