ЦИРКУЛЯРНЫЕ ПЕРМУТАНТЫ БЕЛКА BrUSLEE КАК ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ ИНДИКАТОРЫ рН

Аннотация:

Получены два варианта циркулярных пермутантов BrUSLEE — зеленого флуоресцентного белка с коротким временем жизни флуоресценции. Охарактеризована зависимость кинетик затухания флуоресценции этих флуорофоров от рН. Показано, что оба пермутанта (cpBrUS и cpBrUS-145) демонстрируют трехкомпонентную кинетику затухания флуоресценции, причем время жизни одной из компонент изменяется в диапазоне -3000—300 пс в ответ на сдвиг рН от 5.5 до 9.0, при этом исходный белок BrUSLEE не показывает существенного изменения кинетики затухания флуоресценции в области рН 6.0—8.5, интересной с физиологической точки зрения. Характер измеренной рН-зави-симости позволяет рассматривать полученные пермутанты как индикаторы рН с детекцией сигнала во временном домене. Ключевые слова: флуоресцентные белки, GFP, время жизни флуоресценции, флуоресцентные индикаторы. Один из факторов поддержания гомеостаза и контроля нормальных физиологических функций клеток — специфическая кислотность, характерная для разных субклеточных компартментов. Мониторинг изменений внутриклеточного рН in situ может предоставить ценную информацию о клеточном метаболизме и обеспечить более глубокое понимание физиологических и патологических процессов. Большинство традиционных флуоресцентных индикаторов, выступая мощным инструментом для биоимиджинга в реальном времени, способно лишь к относительной оценке - изменения исследуемого параметра в клетке. Цель настоящей работы — создание генетически кодируемых индикаторов для количественного измерения рН на основе флуоресцентного белка BrUSLEE, который ранее продемонстрировал свой потенциал в качестве метки для FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy), обладающей коротким временем жизни флуоресценции.

Авторы:

Издание: Биоорганическая химия
Год издания: 2022
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2022.-N 4.-С.500-504. Библ. 13 назв.
Просмотров: 17