РАЗРАБОТКА ОСНОВ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО КАТЕПСИНА L Tribolium castaneum В ДРОЖЖАХ Komagataella kurtzmanii

Аннотация:

На базе метилотрофных дрожжей Komagataella kurtzmanii получен штамм-продуцент рекомбинантного прокатепсина L Tribolium castaneum (rpTcCathL), обеспечивший биосинтез и секрецию не менее 0,5 г/л целевого белка в условиях культивирования в колбах на среде комплексного состава. Определено, что рН среды культивирования дрожжей (рН > 6.5) является ключевым фактором, влияющим на биосинтез и накопление прокатепсина. Разработана новая схема хроматографической очистки, позволяющая получать рекомбинантный прокатепсин с выходом около 30% и чистотой свыше 95%. Показано, что полная автокаталитическая активация профермента достигается при температуре 37°С, рН 4.0—4.5 в течение не более 30 мин. При этом в концентрации 0.5 мг/мл и ниже препараты рекомбинантного прокатепсина и активированного катепсина могут сохраняться без детектируемых изменений при температуре +4°С в течение, минимум, двух недель. Таким образом, в результате проведенных исследований были разработаны основы технологии получения и хранения рекомбинантных препаратов высокоочищенного главного пищеварительного катепсина L Т. castaneum в форме профермента и зрелого катепсина L.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2022
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2022.-N 3.-С.22-34. Библ. 23 назв.
Просмотров: 14