СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНЫХ ЭНДОИНУЛИНАЗЫ, ЭКЗОИНУЛИНАЗЫ, САХАРАЗЫ И а-ГАЛАКТОЗИДАЗЫ С

Аннотация:

В результате клонирования генов inuA, inul, aglCwfopA, кодирующих эндоинулиназу (эндоИНУ), экзо-инулиназу (экзоИНУ), а-галактозидазу С (АГЛС) и сахаразу (САХ), в реципиентный штамм Penicillium verruculosum В1-537 (AniaD) получены рекомбинантные штаммы-продуценты, способные с высоким выходом продуцировать целевые рекомбинантные ферменты (32—50% от общего содержания внеклеточного белка). Получены и охарактеризованы ферментные препараты эндоИНУ, экзоИНУ, АГЛС и САХ. С помощью хроматографических методов выделены гомогенные (поданным электрофореза в по-лиакриламидном геле) эндоИНУ, экзоИ НУ, САХ и АГЛС с молекулярной массой 62, 56,67 и 76 кДа соответственно. Гомогенная эндоИНУ имела высокую удельную активность по инулину топинамбура (56 ед/мг); экзоИНУ обладала активностью по инулину (17 ед/мг), сахарозе (850 ед/мг), раффинозе (41 ед/мг) и стахиозе (15 ед/мг); САХ — по сахарозе (10.5 ед/мг), раффинозе и стахиозе (3.8 и 1.4 ед/мг соответственно); АГЛС характеризовалась наличием активности по раффинозе и стахиозе (31 и 30 ед/мг соответственно), не проявляла сахаразной активности, но была высокоактивна по отношению к синтетическому субстрату и-нитрофенил-а-/)-галактозиду (311 ед/мг). Определены кинетические параметры гидролитической активности гомогенных ферментов на соответствующих субстратах (каЛ и Кт). Температурный оптимум эндоИНУ составил 50-55°С, экзоИНУ - 55-65°С, АГЛС - 65°С, САХ - 35°С. ЭндоИНУ проявляла максимум активности при рН 6.5; экзоИНУ — при рН 4.5, АГЛС — при рН 4.5—5.0, а САХ — при рН 5.5—6,0. Изучена термостабильность ферментов при различной температуре. ЭндоИНУ эффективно гидролизовала инулин с образованием фруктоолигосахаридов со степенью полимеризации 3—8. ЭкзоИНУ количественно конвертировала инулин в глюкозо-фруктозный сироп (ГФС) с соотношением Глу: Фру = 1: 3, а также сахарозу в ГФС с соотношением Глу: Фру примерно 1 : 0.63 (САХ гидролизовала сахарозу с таким же соотношением продуктов). Галактоолигосахариды сои (раффиноза и стахиоза) превращались в сахарозу и моносахариды (глюкозу, галактозу и фруктозу) под действием АГЛС, а совместное действие САХ и АГЛС приводило к полной конверсии до моносахаридов как раффинозы и стахиозы, так и сахарозы. Обработка галактоолигосахаридов ЭкзоИНУ приводила к такому же результату. Полученный фермент ЭкзоИНУ можно рассматривать в качестве перспективного для биотехнологического применения вследствие его широкой субстратной специфичности — он может быть использован как для получения ГФС из инулина и сахарозы, так и для деструкции галактоолигосахаридов сои.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2022
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2022.-N 2.-С.14-25. Библ. 17 назв.
Просмотров: 17