РЕКОМБИНАНТНАЯ ВНЕКЛЕТОЧНАЯ ХОЛЕСТЕРИНОКСИДАЗА ИЗ Nocardioides simplex

Аннотация:

Холестериноксидаза (ХО) — фермент, крайне востребованный в медицине, фармацевтике, сельском хозяйстве, химии и биотехнологии. ХО катализирует окисление 3бета-гидрокси-5-ен-фрагмента стероидного ядра с формированием продукта с З-кето-4-ен-структурой и образованием перекиси водорода. Объектом исследования являлась внеклеточная ХО актинобактериального штамма Nocardioides simplex ВКМ Ас-2033Д. Зрелая форма ХО N. simplex (55,6 кДа) с 6хHis-меткой была получена путём экспрессии в клетках Escherichia coli соответствующей нуклеотидной последовательности. Выделение и очистку рекомбинантной ХО N. simplex (ХО№) проводили с помощью аффинной хроматографии. Фермент проявлял активность по отношению к холестерину, холестанолу, фитостерину, прегненолону и дегидроэпиандростерону. Активность ХО зависела от структуры и длины алифатической боковой цепи при С17 стероида и была ниже для прегненолона и дегидроэпиандростерона. ХОNS проявляла активность в диапазоне рН 5,25-:6,5 с оптимумом рН 6,0. Анализ кинетических характеристик и тестов на стабильность при хранении показал, что показатели ХОNS сравнимы или превосходят таковые для коммерческой ХО из Streptomyces hygroscopicus (ХОSh). Результаты расширяют знания о микробных ХО и свидетельствуют о том, что ХО из N. simplex ВКМ Ас-2033Д перспективна для дальнейшего практического применения.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2022
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2022.-N 9.-С.1246-1259. Библ. 34 назв.
Просмотров: 19