АНАЛИЗ АКТИВНОСТИ СТЕРОИДОГЕННОГО РЕГУЛЯТОРНОГО БЕЛКА ОСТРОЙ ФАЗЫ (STARD1) ЧЕЛОВЕКА В КЛЕТКАХ Escherichia coli

Аннотация:

Одним из главных препятствий для успешного использования в биотехнологических процессах клеток Escherichia coli, способных осуществлять трансформацию стероидов, является неэффективный транспорт в клетки стероидных субстратов. В работе тестирована возможность использования белка-переносчика холестерола человека — стероидогенного регуляторного белка острой фазы (STARD1) — для повышения эффективности поглощения стероидов клетками Е. coli. Получены генетические конструкции для синтеза в клетках Е. coli BL21(DE3) делетированной версии белка STARD1, включающей функциональный домен (66-285 аминокислотные остатки), или белка STARDl(66-285)-GFP, несущих на N-конце последовательность бактериального белка pelB, адресующую белок в периплазму. Анализ препаратов клеток Е. coli / pET22b/STARDl-GFP с использованием флуориметрии и Вестерн-иммуноблоттинга подтвердил, что использованная система экспрессии обеспечивает синтез полноразмерного гетерологичного белка. С использованием флуоресцентной спектроскопии показано, что присутствие STARD1 обеспечивает увеличение эффективности ассимиляции NBD-меченых аналогов холестерола клетками Е. coli/pET22b/STARDl в 1,3—1,6 раза (р < 0,05) в сравнении с клетками дикого штамма. Таким образом, впервые обнаружено, что STARD1 человека способен проявлять функциональную активность в клетках бактерий, что открывает перспективы для оптимизации и использования фундаментально нового подхода для повышения эффективности поглощения стероидов клетками — включения в мембрану клетки специфического белка-переносчика, который может расширить арсенал методов, использующихся при получении штаммов микроорганизмов для синтеза широко востребованных стероидных соединений.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2022
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2022.-N 9.-С.1334-1341. Библ. 26 назв.
Просмотров: 16