Биологическая характеристика холодоадаптированных вариантов коронавируса SARS-CoV-2

Аннотация:

В связи с появлением новых эпидемиологически значимых вариантов SARS-CoV-2 актуальной является разработка живой вакцины, способной обеспечить защиту против широкого спектра антигенных вариантов вируса. Целью исследования являлись получение и биологическая характеристика аттенуированных путём холодовой адаптации вариантов SARS-CoV-2. Материалы и методы. Лабораторный штамм SARS-CoV-2 Dubrovka и его варианты культивировали в клетках Vero и Calu-З. Количественное определение вируса проводили путём титрования в клетках Vera и методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в режиме реального времени. Вирионы SARS-CoV-2 характеризовали методом трансмиссионной электронной микроскопии. Геномные последовательности вируса определяли методом нанопорового секвенирования. Аттенуационный (aff) фенотип вариантов SARS-CoV-2 определяли на животной модели COVID-19 на сирийских хомяках. Результаты. В результате длительного пассирования штамма Dubrovka в культуре клеток Vero при постепенно понижаемой до 23°С температуре и последующего клонирования получены холодоадаптированные (са, cold-adapted) варианты SARS-CoV-2 Dubrovka-ca-B4 и Dubrovka-ca-D2. В геномах са-вариантов обнаружено до 20 нуклеотидных и 18 аминокислотных замен. Са-варианты, в отличие от родоначального штамма Dubrovka, эффективно размножались при 23°С, а вариант Dubrovka-ca-D2 имел температурочувствительный (fs) фенотип (не размножался при температуре 39°С). Са-варианты вируса плохо размножались при температуре 37°С в культуре клеток лёгких человека Calu-З, что, наряду с fs-фенотипом, может быть маркером аттенуации вируса по отношению к человеку. При интраназальном заражении сирийских хомяков са-варианты вируса проявили аттенуационный фенотип — не приводили к снижению аппетита, вялости, сонливости, не замедляли прироста массы тела, значительно медленнее размножались в лёгких и мозге по сравнению с вирулентным штаммом Dubrovka. Заключение. Полученные в настоящей работе аттенуированные са-варианты SARS-CoV-2 Dubrovka-са-В4 и Dubrovka-ca-D2 представляют интерес для дальнейшего исследования в качестве кандидатных вакцинных штаммов для создания живой аттенуированной вакцины против COVID-19.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2022
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2022.-N 4.-С.397-409. Библ. 32 назв.
Просмотров: 13