НОВЫЕ FRET-ПАРЫ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ БЕЛКОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КАСПАЗ IN VITRO

Аннотация:

Получен мономерный сенсор на эффекторную каспазу-3 TagRFP-23-Ultramarine (TR-23-U). Рассчитаны интегралы перекрывания новых пар красного флуоресцентного белка TagRFP с четырьмя хромобелками. Методами гель-фильтрации и динамического рассеяния света подтверждено мономерное состояние белка Ultramarine и сенсора TR-23-U. Инкубация с каспазой-3 показала возможность применения нового белка слияния в качестве FRET-сенсора для детекции апоптоза. Детекция процессов, происходящих в организме и отдельной клетке играет ключевую роль в создании лекарств и терапии различных заболеваний. Целью многих лекарственных препаратов является инициация апоптоза. Каспаза-3 хорошо известна своей ролью в осуществлении специфического расщепления многих клеточных белков при запрограммированной гибели клеток, а также в регуляции клеточного гомеостаза. Явление ферстеровского резонансного переноса энергии внутри пары флуоресцентных белков широко применяется в FRET-сенсорах для определения активности каспазы-3, благодаря возможности их непосредственной экспрессии в живой клетке. Ферстеровский резонансный перенос энергии (Forster resonance energy transfer, FRET) — это процесс взаимодействия двух хромофоров, при котором происходит безызлучательный перенос энергии возбужденного состояния от донора к акцептору. При таком переносе происходит снижение интенсивности и уменьшение времени жизни флуоресценции донора. В случае флуоресцирующего акцептора при FRET одновременно происходит возбуждение флуоресценции акцептора. Цель работы — проанализировать эффективность переноса энергии в новых FRET-napax красного флуоресцентного белка TagRFP с хромобелками путем расчета интегралов перекрывания, получить мономерный сенсор TagRFP-23-хромобелок и показать возможность применения нового белка слияния в качестве FRET-cенсора для детекции апоптоза.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2022
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2022.-N 6.-С.592-597. Библ. 20 назв.
Просмотров: 14