Индуцированные глутаматом и ишемией изменения ионного гомеостаза в нейрональной культуре и коре головного мозга мышей, экспрессирующих Са2+-сенсор GCaMP6f

Аннотация:

При исследованиях внутриклеточного сигналинга и межнейрональной передачи сигнала в мозге в норме и при патологии все большее применение находят трансгенные животные, экспрессирующие в нейронах флуоресцентный Са2+-сенсор. Вместе с тем, пока недостаточно исследовано, насколько изменения кальциевого гомеостаза в интактном мозге соотносятся с гораздо более подробно изученными изменениями этого важнейшего параметра в нейроглиальных культурах, служащих модельными системами живого мозга. Целью работы было на модели ишемического инсульта выяснить в какой степени изменения внутриклеточной концентрации Са2+ ([Са2+]) в мозге трансгенной мыши, измеренные с помощью флуоресцентного белкового сенсора GCaMP6f, соотносятся с изменениями [Са2+] в первичных нейроглиальных культурах из кортекса этих животных. Методом широкопольной оптической нейровизуализации (ШОН) измерены изменения концентрации свободного Са2+ в цитозоле нейронов ([Са2+]c) головного мозга мышей. Измерения проводили перед и после фотоиндуцированного инсульта в сенсомоторной зоне коры. Изменения [Са2+]с отслеживали по флуоресценции GCaMP6f, экспрессируемого в нейронах кортекса. На первичных нейроглиальных культурах из коры головного мозга мышей той же линии проверено влияние эксайтотоксических доз глутамата (Glu) на [Са2+]с и на изменения средней концентрации свободного Са2+ в цито- и нуклеоплазме ([Са2+]i). Измерения [Са2+]i выполнены методом флуоресцентной микроскопии с использованием синтетических Са2+- индикаторов Fura-2 и Fura-FF. В культивируемых нейронах дополнительно к измерениям кальциевого гомеостаза выполнены измерения внутриклеточного pH (pHi), митохондриального потенциала и эндогенной флуоресценции NADH. В результате фотоиндуцированная ишемия вызывает сильный рост [Са2+]с в зоне облучения ~1,1 мм2 (n=9). В течение суток область высокой [Са2+]с расширяется до ~6 мм2, но к 7-м сут практически возвращается к размерам необратимого повреждения. В нейроглиальных культурах из коры головного мозга мышей этой же линии кинетика изменений [Са2+]с, индуцированных Glu, напоминает кинетику [Са2+]i, однако [Са2+]с имеет значительно меньшую амплитуду при развитии отсроченной кальциевой дисрегуляции (ОКД). Сопоставление изменений [Са2+] и pHi показывает, что различия могут быть обусловлены тушением флуоресценции GCaMP6f при закислении цитозоля в результате эксайтотоксического действия Glu. Заключение. Сопоставление сигналов экспрессируемого нейронами Са2+-сенсора GCaMP6f в мозге и синтетических Са2+-индикаторов в первичных нейроглиальных культурах, полученных из животных той же линии, показывает, что феномен ОКД, впервые обнаруженный в культурах, вероятно, реализуется и в нейронах целого мозга при инсульте. Вместе с тем, необходимо учитывать, что относительные изменения [Са2+]с на разных стадиях развития ишемического повреждения и последующего восстановления мозга после фотоиндуцированного инсульта, могут быть искажены за счет влияния pHi на флуоресценцию белкового сенсора.

Авторы:

Издание: Патологическая физиология и экспериментальная терапия
Год издания: 2023
Объем: 16с.
Дополнительная информация: 2023.-N 1.-С.5-20. Библ. 40 назв.
Просмотров: 12