О-AЦЕТИЛГОМОСЕРИНСУЛЬФГИДРИЛАЗА ИЗ Clostridioides difficile: РОЛЬ ОСТАТКОВ ТИРОЗИНА АКТИВНОГО ЦЕНТРА

Аннотация:

О-ацетилгомосеринсульфгидрилаза является одним из ключевых ферментов в биосинтезе метионина в Clostridioides difficile. Механизм реакции у-замещения О-ацетил-L-гомосерина, катализируемой этим ферментом, наименее изучен среди пиридоксаль-5’-фосфат-зависимых ферментов, участвующих в метаболизме цистеина и метионина. Для выяснения роли остатков активного центра Туr52 и Туr107 получены четыре мутантные формы фермента с заменами на фенилаланин и аланин. Исследованы каталитические и спектральные свойства мутантных форм. Скорость реакции у-замещения, катализируемой мутантными формами с заменой остатка Туr52, уменьшилась более чем на три порядка по сравнению с ферментом дикого типа. Мутантные формы Tyr107Phe и Туr107А1а практически не катализировали данную реакцию. Замены остатков Туr52 и Туr107 привели к уменьшению сродства апофермента к кофактору на три порядка и изменениям ионного состояния внутреннего альдимина фермента. Полученные результаты позволили сделать предположение, что остаток Туr52 участвует в обеспечении оптимального положения каталитического кофактор-связывающего остатка лизина на стадиях отрыва С-а-протона и элиминирования боковой группы субстрата. Остаток Туr107 может выполнять роль общего кислотного катализатора на стадии элиминирования ацетата.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2023
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2023.-N 5.-С.737-747. Библ. 29 назв.
Просмотров: 17