МЕХАНИЗМ ИНГИБИРОВАНИЯ D-ЦИКЛОСЕРИНОМ ТРАНСАМИНАЗЫ D-АМИНОКИСЛОТ ИЗ Haliscomenobacter hydrossis

Аннотация:

D-Циклосерин ингибирует пиридоксаль-5'-фосфат (РLР)-зависимые ферменты с различной эффективностью в зависимости от организации активного центра фермента и механизма катализируемого превращения. D-Циклосерин взаимодействует с PLP-формой фермента подобно субстратам (аминокислотам) и преимущественно обратимо. Известно несколько продуктов взаимодействия PLP с D-циклосерином, при этом для некоторых ферментов образование стабильного ароматического гидроксиизоксазол-пиридоксамин-5'-фосфата при определённых значениях pH приводит к необратимому ингибированию. Цель данной работы состояла в определении механизма ингибирования D-циклосерином PLP-зависимой трансаминазы D-аминокислот из бактерии Haliscomenobacter hydrossis, которая характеризуется иной, чем у канонических трансаминаз D-аминокислот, организацией активного центра. Спектральными методами обнаружено несколько продуктов взаимодействия D-циклосерина и PLP в активном центре трансаминазы: оксим, образованный PLP и бета-аминоокси-D-аланином; кетимин, образованный пиридоксамин-5'-фосфатом и D-циклосерином в циклической форме; и пиридоксамин-5'-фосфат. Образование гидроксиизоксазол-пиридоксамин-5'-фосфата не установлено. Методом рентгеноструктурного анализа получена пространственная структура комплекса трансаминазы с D-циклосерином. В активном центре трансаминазы обнаружен кетимин, образованный пиридоксамин-5'-фосфатом и циклической формой D-циклосерина. Кетимин находится в двух положениях, в которых он образует водородные связи с разными остатками активного центра. Кинетическими и спектральными методами показаны обратимость ингибирования D-циклосерином трансаминазы из Н. hydrossis и восстановление активности фермента как избытком кетосубстрата, так и избытком кофактора. Полученные результаты подтверждают взаимопревращение аддуктов D-циклосерина и PLP, а также обратимость ингибирования D-циклосерином PLP-зависимых трансаминаз.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2023
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2023.-N 5.-С.841-853. Библ. 33 назв.
Просмотров: 17