ВЛИЯНИЕ СТИМУЛЯЦИИ И ПОДАВЛЕНИЯ БИОСИНТЕЗА NAD+ НА ПОДДЕРЖАНИЕ ПЛЮРИПОТЕНТНОСТИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК МЫШИ

Аннотация:

Никотинамидадениндинуклеотид (NAD+) играет ключевую роль в клеточном метаболизме и сигналинге. В последние годы появилось множество свидетельств того, что КАО+-зависимые процессы принимают участие в регуляции плюрипотентности и дифференцировки эмбриональных стволовых клеток млекопитающих. Основным способом поддержания уровня NAD+ в клетках млекопитающих является его биосинтез из различных форм витамина ВЗ. В настоящей работе мы выяснили, как стимуляция и подавление биосинтеза NAD+ влияют на поддержание плюрипотентности эмбриональных стволовых клеток мыши линии Е14 Tg2a (клетки Е14). Статус плюрипотентности клеток Е14 оценивали при помощи иммуноцитохимического анализа и иммуноблоттинга с использованием антител к фактору плюрипотентности Oct4, а также окраски на щелочную фосфатазу. С помощью метода ЯМР-спектроскопии мы установили, что концентрация NAD+ в плюрипотентных клетках Е14, культивируемых в присутствии фактора ЛИФ, составляет около 4 нмоль/мг и остается неизменной после индукции дифференцировки ретиноевой кислотой. Также мы показали, что фармакологическая стимуляция биосинтеза NAD+ никотинамид-рибозидом повышает уровень внутриклеточного NAD+ на 20%, и это не влияет на поддержание плюрипотентности клеток Е14. Более того, в условиях критического истощения внутриклеточного пула NAD+ при подавлении его синтеза из никотинамида ингибитором Nampt (FK866) клетки Е14 сохраняли плюрипотентность, в то время как уровень белка Oct4 был понижен.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2023
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2023.-N 3.-С.273-282. Библ. 12 назв.
Просмотров: 14