ПОЛУЧЕНИЕ НУЛЕВОЙ МУТАЦИИ ГЕНА TOOTHRIN МЕТОДОМ НАПРАВЛЕННОЙ ГОМОЛОГИЧНОЙ РЕКОМБИНАЦИИ У DROSOPHILA MELANOGASTER

Аннотация:

Ген toothrin (tth) дрозофилы является родственным консервативному семейству генов d4, кодирующих специфические факторы транскрипции у многоклеточных животных. В предыдущих работах мы исследовали эффект оверэкспрессии гена tth и охарактеризовали специфический паттерн его экспрессии в нервной системе, но мутации в гене tth до сих пор не были обнаружены. Нулевые мутанты необходимы для анализа функций генов и скрининга их генов-партнеров. В работе мы описываем получение первых дрозофил, нокаутных по гену tth, с помощью метода гомологичной рекомбинации и впервые характеризуем фенотип летальных эмбрионов, вызванный потерей функции этого гена. Один из методов изучения функции гена — анализ последствий ее потери (loss-of-function). Чтобы "выключить", или "нокаутировать", исследуемый ген достаточно получить его делецию. Выводы касательно функций генов делают, сравнивая фенотипы нормальных и нокаутированных по исследуемому гену организмов. Нокаут генов можно выполнить различными методами. Одним из них является метод направленной гомологичной рекомбинации ДНК, когда копия исследуемого гена заменяется последовательностью маркерного гена, который затем легко удалить с помощью сайт-специфической рекомбинации (Gong, Go lik, 2003). При сайт-специфической рекомбинации обмен участками ДНК происходит по конкретным коротким сайтам гомологии. В настоящее время разработана универсальная система сайт-специфической рекомбинации с использованием Сге-рекомбиназы бактериофага Р1 — система Cre-Lox. Эту систему используют для получения делеций, инверсий, вставок, транслокаций и других модификаций в хромосомной или эписомной ДНК. Метод подразумевает встраивание в геном модельного организма последовательности гена, кодирующего фермент Сге-рекомбиназу бактериофага Р1 и ее таргетны последовательностей loxP {locus of crossing-over of Р1).

Авторы:

Издание: Онтогенез
Год издания: 2023
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2023.-N 3.-С.232-238. Библ. 11 назв.
Просмотров: 15