КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ С1-ЭСТЕРАЗНОГО ИНГИБИТОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА: КОРРЕЛЯЦИЯ С ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Аннотация:

Cl-ингибитор сериновых протеаз (C1-INH) выполняет регуляторную функцию в системе комплемента и проницаемости сосудов. Дефицит C1-INH приводит к различным формам ангиоотеков, в том числе наследственному ангионевротическому отеку (НАО). Причиной НАО является генетически обусловленное нарушение синтеза C1-INH. Снижение уровня C1-INH до 50% относительно нормы приводит к увеличению продукции брадикинина, что является основанием для постановки диагноза «НАО». Разработка доступных иммуноферментных тест-систем (ИФА) для количественного определения C1-INH является востребованным направлением для клиницистов. В процессе разработки нового набора для количественного определения C1-INH были получены два моноклональных антитела мыши (МАТ), обладающих разной эпитопной специфичностью. На их основе была разработана ИФА тест-система по типу сэндвич. Специфичность полученных МАТ была подтверждена с использованием коммерческого препарата «Беринерт». Для приготовления калибраторов C1-INH был аффинноочищен из плазмы крови человека с использованием сорбента с иммбилизованными МАТ. Идентичность белку C1-INH подтверждали при помощи электрофореза в ПААТ, иммуноблоттинга и масс-спектрометрии на MALDI-TOF/TOF масс-спектрометре UltrafleXtreme. Для оценки показателей качества разработанного набора реагентов были проведены исследования в соответствии с ГОСТ Р 51352-2013 и ТУ 21.20.23-041-01967164-2022. Значения показателей качества: точность (правильность) — 93,53%; интервал линейности измерений — 22,00-176,07 нг/мл. Присутствие интерферирующих агентов (гемоглобина, билирубина, триглицеридов) не влияло на эффективность измерений. С помощью разработанной ИФА тест-системы нами были исследованы 28 сывороток крови здоровых доноров и 7 сывороток крови пациентов с подтвержденным диагнозом «НАО». В этих же образцах определяли содержание C1-INH при помощи турбидиметрического метода, используя, медицинское изделие «Реагенты диагностические для иммунохимических исследований in vitro специфических белков крови. Модель: Cl-ингибитор эстеразы (Cl Esteraselnhibitor)» (Aptec, Бельгия). Коэффициент корреляция составил 0,94 (р < 0,05). Было установлено, что диагностическая чувствительность и специфичность разработанной тест-системы составляет 100%. В результате проведенного исследования разработана оригинальная ИФА тест-система для количественного определения С1-INH «Набор реагентов для иммуноферментного количественного определения С1 -ингибитора человека (С1 -inh PS)».

Авторы:

Издание: Медицинская иммунология
Год издания: 2023
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2023.-N 5.-С.1197-1204. Библ. 6 назв.
Просмотров: 14