Получение рекомбинантного RBD Spike-белка SARS-CoV-2 в клетках Escherichia coli, связывание с антителами и противовирусная активность

Аннотация:

Цель работы. Получение синтезом в клетках Escherichia coli рекомбинантного белка, включающего RBM Spike-белка SARS-CoV-2, не уступающего по своей противовирусной активности RBD, полученному в эукариотическом продуценте (eRBD). Материал и методы. Белки 6His-RBDshort (24,4 кД) и 6His-RBDlong (33,7 кД) были экспрессированы в штамме Escherichia coli BL21 (DE3). Хроматографическую очистку белков проводили на сорбентах WorkBeads 40 Ni-NTA и WorkBeads 40S с последующим многоступенчатым рефолдингом. Иммуноферментный анализ проводили с использованием гуманизированных однодоменных моноклональных антител GamP2C5 и GamXRH19, специфичных в отношении RBD Spike-белка SARS-CoV-2. Противовирусная активность в отношении вируса SARS-CoV-2 была исследована на клетках линии Vero Е6. Результаты. Синтезом в клетках Escherichia coli получен рекомбинантный белок 6His-RBDshort, включающий RBM (рецептор-связываюший мотив) Spike-белка вируса SARS-CoV-2 (330—527 а.о.). Проведена двухстадийная хроматографическая очистка рекомбинантного белка 6His-RBDshort с последующим рефолдингом. Иммуноферментный анализ продемонстрировал эффективное взаимодействие рекомбинантного белка 6His-RBDshort с вируснейтрализующими антителами, сравнимое с эукариотическим белком eRBD. Исследование противовирусной активности показало ингибирование размножения вируса SARS-CoV-2 после обработки клеток Vero Е6 белками 6His-RBDshort (45,1%) и eRBD (42,8%). Полученный в этой же работе рекомбинантный белок 6His-RBDlong, включающий более длинный участок RBD, не взаимодействовал с вируснейтрализующими антителами и не ингибировал репликацию вируса SARS-CoV-2. Заключение. После проведения дополнительных исследований разработанный рекомбинантный белок 6His-RBDshort может быть рассмотрен в качестве перспективного препарата для использования в терапевтических целях в качестве блокатора рецептора АСЕ2.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2023
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2023.-N 2.-С.28-35. Библ. 28 назв.
Просмотров: 13