Направленная нейрональная дифференцировка клеток нейробластомы человека линии SH-SY5Y на 2D матриксах, содержащих модифицированные пептидами клеточной адгезии рекомбинантные спидроины

Аннотация:

Цель исследования. Важным для создания тканеинженерных конструкций, предназначенных для лечения патологий нервной системы, является использование эффективных и недорогих подложек (2D матриксов) для культивирования и дифференцировки нервных клеток in vitro. Перспективными для решения этой задачи представляются рекомбинантные аналоги белков каркасной нити паутины пауков-кругопрядов — спидроинов 1 и 2. Целью исследования являлась оценка влияния клеточных подложек, полученных из смесей рекомбинантных спидроинов (PC) rS1/9 и rS2/12 с гибридными белками (ГБ), содержащими мономер rS1/9, слитый с биологически активными пептидами, на уровни экспрессии генов ключевых синапс-специфичных белков и жизнеспособности клеток нейробластомы человека линии SH-SY5Y при направленной холинергической дифференцировке. Применяли двухстадийную схему направленной холинергической дифференцировки клеток SH-SY5Y с использованием ретиноевой кислоты и нейротрофического фактора мозга (BDNF). Жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ-теста и окрашивания кристаллическим фиолетовым. Уровни мРНК исследуемых генов оценивали с помощью ПИР в режиме реального времени. В результате направленная дифференцировка клеток SH-SY5Y сопровождалась существенным повышением уровней экспрессии генов синаптофизина, синапсинов I, II и постсинаптического белка PSD-95. Наибольшая жизнеспособность клеток и повышенные уровни экспрессии PSD-95 обнаружены при дифференцировке на подложке, состоящей из смеси PC rS1/9 и rS2/12 с ГБ, содержащими пептид RGDS (присутствующий в белках внеклеточного матрикса) и гепарин-связывающий пептид (НВР, фрагмент ламинина). Заключение. Наибольшую эффективность при направленной холинергической дифференцировке клеток SH-SY5Y показала подложка, состоящая из смеси PC rS1/9 и rS2/12 и ГБ на основе мономера PC rS1/9, слитого с RCDS (лиганд интегринов) и НВР (лиганд ростовых факторов и синдеканов). Подложки, состоящие только из PC rS2/12 или смеси rS2/12 с EB(RCDS) продемонстрировали более низкую эффективность, однако использование пептида GRGCL (взаимодействующего с нейральными молекулами клеточной адгезии и входящего в состав PC rS1/9) приводило к повышению эффективности.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2023
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2023.-N 3.-С.16-24. Библ. 30 назв.
Просмотров: 13