СРАВНЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНЫХ ХИМОЗИНОВ АЛЬПАКА (Vicugnapacos), ПОЛУЧЕННЫХ В ПРО- И ЭУКАРИОТЕЧЕСКОЙ СИСТЕМАХ ЭКСПРЕССИИ

Аннотация:

На основе дрожжей Kluyveromyces lactis разработан штамм-продуцент рекомбинантного прохимозина альпака (Vicugnapacos). Проведен сравнительный анализ биохимических свойств рекомбинантного химозина альпака, полученного в системах экспрессий К. lactis и Escherichia coli. Установлено, что рекомбинантный химозин альпака, синтезированный в К. lactis превосходил аналог, полученный в Е. coli, по числу оборотов фермента в 12.9 раза, а по каталитической эффективности — в 2.9 раза. По сравнению с химозином, экспрессированным в Е. coli, фермент, полученный в эукариотическом продуценте, имел повышенный на 5°С порог термостабильности. Замена прокариотического продуцента на эукариотический, усиливала падение молокосвертывающей активности фермента в ответ на изменение pH молока от 6.1 до 6.9, что сопровождалось увеличением продолжительности коагуляции на 8—35%. При повышении концентрации СаС12 в субстрате коагуляционная активность целевого фермента, синтезированного в Е. coli была на 12—14% выше, чем у его аналога, полученного в К. lactis. Химозин (Хи) (КФ 3.4.23.4) — аспарагиновая протеаза, которая широко применяется в качестве коагулянта молока при производстве различных видов сычужных сыров. Традиционно Хн получали из сычугов молочных телят, но сегодня его основным источником являются генетически модифицированные штаммы микроорганизмов. Актуальность исследования новых видов рекомбинантных Хн (рХн) обусловлена возможностью обнаружения ферментов, превосходящих по комплексу биохимических свойств уже известные генно-инженерные коагулянты молока. Общеизвестно, что у прокариотов, в отличие от эукариотов, почти полностью отсутствуют посттрансляционные модификации (ПТМ) белков. В подавляющем большинстве случаев, одни и те же рекомбинантные белки, полученные в про- и эукариотической системе экспрессии, различаются по физико-химическим и биохимическим характеристикам. Однако однозначного ответа на вопрос о характере влиянии системы экспрессии на биохимические свойства получаемых рекомбинантных белков — не существует. Литературные данные, посвященные изучению этого вопроса, свидетельствуют, преимущественно, о том, что a priori прогнозировать влияние системы экспрессии на биохимические свойства целевого рекомбинантного белка крайне затруднительно.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2023
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2023.-N 5.-С.465-471. Библ. 21 назв.
Просмотров: 16