НОВАЯ ДВУХДОМЕННАЯ ЛАККАЗА СО СРЕДНИМ ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫМ ПОТЕНЦИАЛОМ: ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И СТРУКТУРНЫЕ СВОЙСТВА

Аннотация:

Ген ранее неисследованной двухдоменной лакказы был идентифицирован в геноме актинобактерии Streptomyces carpinensis ВКМ Ас-1300. Двухдоменная лакказа, названная ScaSL, была продуцирована в гетерологичной системе экспрессии (штамм Escherichia coli М15 [pREP4]). Фермент был очищен до гомогенного состояния с использованием аффинной хроматографии. Лакказа ScaSL, как и большинство двухдоменных лакказ, проявляла активность в форме гомотримера. Однако, в отличие от большинства двухдоменных лакказ, она была активна и в мультимерных формах. Фермент проявлял максимальную активность при 80 °C и был термостабилен. Время полуинактивации ScaSL при 80 °C составило 40 мин. Лакказа окисляла нефенольное органическое соединение 2,2'-азинобис(3-этилбензотиазолин сульфонат) (АБТС) с максимальной скоростью при pH 4,7, окисляла фенольное соединение 2,6-диметоксифенол с максимальной скоростью при pH 7,5. Стабильность лакказы наблюдалась в диапазоне pH 9—11. При pH 7,5 лакказа слабо ингибировалась азидом натрия, фторидом натрия и хлоридом натрия; при pH 4,5 лакказа полностью ингибировалась 100 мМ азидом натрия. Значения Кm и Kcat фермента для АБТС составили 0,1 мМ и 20 с-1, а для 2,6-диметоксифенола — 0,84 мМ и 0,36 с-12 соответственно. ScaSL катализировала полимеризацию гуминовых кислот и лигнина. Окислительно-восстановительный потенциал лакказы составил 0,472 ± 0,007 В. Таким образом, лакказа ScaSL — первая охарактеризованная двухдоменная лакказа со средним окислительно-восстановительным потенциалом. Кристаллическая структура ScaSL была определена с разрешением 2,35 А. Сравнительный анализ структур ScaSL и других двухдоменных лакказ позволил предположить, что средний потенциал ScaSL может быть связан с конформационными различиями в положениях боковых групп аминокислот в позиции 230 (в нумерации ScaSL), относящихся ко второй координационной сфере атома меди Т1-центра.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2023
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2023.-N 10.-С.2002-2013. Библ. 50 назв.
Просмотров: 18