Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

ВЛИЯНИЕ РАСПОЛОЖЕНИЯ И ОРИЕНТАЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ТОКСИН-АНТИТОКСИНОВОГО ЭЛЕМЕНТА hok/sok НА УРОВЕНЬ БИОСИНТЕЗА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ БЕЛКОВ В БАКТЕРИАЛЬНОЙ СИСТЕМЕ ЭКСПРЕССИИ


Аннотация:

Генетический токсин-антитоксиновый элемент hok/sok из плазмиды R1 Escherichia coli обеспечивает сегрегационную стабильность плазмид. Бактериальные клетки, потерявшие все копии плазмиды, кодирующей короткоживущий антитоксин, гибнут под действием долгоживущего токсина. Элемент hok/sok в составе векторных плазмид для бактериальной экспрессии может увеличивать продуктивное время биосинтеза рекомбинантных белков, замедляя накопление в популяции непродуцируюших клеток, лишенных целевой плазмиды. В настоящей работе были исследованы различные варианты расположения и ориентации элемента hok/sok в составе стандартной плазмиды рЕТ28а с индуцибельным промотором Т71ас и геном устойчивости к канамицину. Было обнаружено, что элемент hok/sok сохраняет функциональную активность вне зависимости от расположения на плазмиде и ориентации, бактериальные клетки сохраняли плазмиды с hok/sok после 4-х дней культивирования без антибиотика и теряли контрольную плазмиду без данного элемента. На примере трех целевых белков — аспаргиназы Е. coli тип II, гормона роста человека и нуклеопротеина вируса SARS-CoV-2 было продемонстрировано, что для цитоплазматических целевых белков максимальная продуктивность бактерий сохраняется только при расположении элемента hok/sok на плазмиде выше промотора целевого гена. В случае периплазматической локализации белка продуктивность бактерий уменьшается для всех вариантов расположения hok/sok при культивировании с антибиотиком, а при периодическом культивировании бактерий без антибиотика продуктивность лучше сохраняется также при расположении элемента hok/sok выше промотора целевого гена. Данный вариант векторной плазмиды pEHU позволяет увеличить биосинтез нерастворимого в цитоплазме бактерий гормона роста человека более, чем в 2 раза при культивировании бактерий без антибиотика, а также поддерживать биосинтез аспарагиназы при периодическом культивировании без антибиотика в течение 4-х дней на уровне не менее 10 мг/литр. Разработанный сегрегационно стабилизированный плазмидный вектор может быть использован для получения в клетках Е. coli различных рекомбинантных белков без применения антибиотиков.

Авторы:

Ходак Ю.А.
Шайфутдинов Р.Р.
Хасанов Д.С.
Орлова Н.А.
Воробьев И.И.

Издание: Биохимия
Год издания: 2023
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2023.-N 9.-С.1606-1619. Библ. 33 назв.
Просмотров: 16

Рубрики
Ключевые слова
coli
escherichia
sars-cov-2
активность
антибиотик
антитоксины
аспарагиназа
аспаргиназа
бактериального
бактерии
белки
белковая
белковый
биоинженерия
биосинтез
болеющие
бытовые
вариантные
вектор
вирус
влияние
время
гена
генетическ
геном
гетерологическая
гормон
данные
данных
действие
зависимости
использованием
исследования
канамицин
клетка
клетки
клеток
ключ
контрольные
копия
коротким
культивирование
литые
локализации
максимальная
накопление
настоящие
нуклеопротеины
обнаружение
ориентация
периодическая
периплазм
плазмида
плазмидный
поддержка
поза
получение
популяции
после
потери
применение
продуктивность
продуктов
промотора
работа
различный
расположение
рекомбинантная
рекомбинантные
роста
сегрегация
систем
слова
случаев
соматотропин
состав
стабилизир
стабильность
стандартные
т7
течения
тип
токсин
увеличить
уровень
уровни
устойчивости
фармацевтический
функциональная
целевая
целевой
цитоплазма
цитоплазматическая
человек
экспрессия
элементы
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 44.192.95.161)
Яндекс.Метрика