РЕДАКТИРОВАНИЕ ГЕНОМА Komagataella phaffii С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СИСТЕМЫ CRISPR/Cas9 ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЗМАРКЕРНОГО ШТАММА-ПРОДУЦЕНТА ФИТАЗЫ

Аннотация:

На основе штамма Komagataella phaffii ВКПМ Y-4287 с высоким экспрессионным потенциалом с использованием системы CRISPR/Cas9 были разработаны штаммы-реципиенты К. phaffii ВКПМ Y-5013 (фенотип His-) и К. phaffii ВКПМ Y-5014 (фенотип Leu-), позволяющие на их основе получать безмаркерные штаммы-продуценты гетерологичных белков. Эффективность инактивации генов с использованием различных вариантов гидовых РНК (sgPHK) составила 65—98% для гена HIS4 и 15-72% - для гена LEU2. Было показано, что полученные штаммы-реципиенты сохранили ростовые характеристики, присущие родительскому штамму К. Phaffii ВКПМ Y-4287, и высокий экспрессионный потенциал, оцененный по уровню продукции гетерологичного фермента фитазы из Citrobacter gillenii. Средняя продуктивность трансформантов, полученных на основе штаммов К. phaffii ВКПМ Y-5O13 и К. phaffii ВКПМ Y-5014, была в 2,1 и 2,0 раза выше продуктивности трансформантов, полученных на основе коммерческого штамма К. phaffii GS115 соответственно. Предложен способ последовательной интеграции экспрессионной кассеты в геном штамма-реципиента К. phaffii ВКПМ Y-5013, и получен высокоэффективный многокопийный безмаркерный штамм-продуцент фитазы С. gillenii.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2023
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2023.-N 9.-С.1620-1630. Библ. 36 назв.
Просмотров: 17