Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ФОТОРИНА, НОВОГО БЕЛКОВОГО ИНГИБИТОРА ПРОТЕАЗ ИЗ ЭНТОМОПАТОГЕННОЙ БАКТЕРИИ Photorhabdus laumondii


Аннотация:

Энтомопатогенные бактерии рода Photorhabdus секретируют протеазу S (PrtS), которая рассматривается как фактор вирулентности. Нами обнаружено, что в геномах Photorhabdus непосредственно за генами prtS расположены гены, которые кодируют небольшие гипотетические белки, гомологичные эмфорину, открытому недавно белковому ингибитору металлопротеаз. Ген эмфориноподобного ингибитора из Photorhabdus laumondii subsp. laumondii TT01 был клонирован и экспрессирован в клетках Escherichia coli. Рекомбинантный белок, названный фоторином (Phin), очищен с помощью металл-хелатной аффинной и гельпроникающей хроматографии и охарактеризован. Установлено, что Phin является мономером и ингибирует активность протеализина и термолизина, относящихся, как и PrtS, к семейству пептидаз М4. Константы ингибирования составили 1,0 ± 0,3 и 10 ± 2 мкМ соответственно. Продемонстрировано также, что Phin способен подавлять протеолитическую активность культуральной жидкости Р. laumondii (концентрация полумаксимального ингибирования 3,9 ± 0,3 нМ). Получены поликлональные антитела к Phin, и методом иммуноблоттинга показано, что Phin продуцируется клетками Р laumondii. Таким образом, гены prtS у энтомопатогенных бактерий рода Photorhabdus колокализованы с генами эмфориноподобных ингибиторов, которые, вероятно, регулируют активность фермента при инфекции. Строгая регуляция активности протеолитических ферментов является критической для функционирования всех живых систем. В то же время принципы регуляции активности протеаз белковыми ингибиторами остаются малоизученными. Бактериальные пары протеаза-ингибитор, такие как пара PrtS и Phin, являются многообещающей моделью для in vivo исследований этих принципов. Бактерии рода Photorhabdus имеют сложный жизненный цикл с несколькими хозяевами, являясь симбионтами нематод и мощными патогенами насекомых. Это даёт уникальную возможность использовать пару PrtS и Phin в качестве модели для изучения принципов регуляции активности протеаз белковыми ингибиторами в контексте взаимодействия бактерий с разными типами хозяев.

Авторы:

Бердышев И.М.
Светлова А.О.
Чухонцева К.Н.
Карасева М.А.
Варижук А.М.
Филатов В.В.
Клейменов С.Ю.
Костров С.В.
Демидюк И.В.

Издание: Биохимия
Год издания: 2023
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2023.-N 9.-С.1642-1654. Библ. 50 назв.
Просмотров: 16

Рубрики
Ключевые слова
coli
escherichia
in
photorhabdus
vivo
активность
антитела
аффинная
бактериального
бактерии
белки
белковый
белок
биохимия
вероятность
взаимодействие
вирулентность
возможности
время
гель
ген
гена
геном
гены
гомология
живого
жидкостей
жизненная
изучение
иммуноблоттинг
ингибирование
ингибитор
ингибиторы
инфекцией
исследование
качества
клетка
клоны
ключ
константа
концентрация
критическая
культуральная
культуральные
малого
металла
металлопротеаза
метод
модели
мономер
насекомые
небольших
нематоды
непосредственные
нескольким
новые
обнаружение
образ
открытого
пара
пары
патоген
пептидазы
пола
поликлональные
получение
помощи
принцип
протеаз
протеазы
протей
протеолитические
разным
регуляции
регуляция
рекомбинантная
рекомбинантные
родами
секрет
семейства
систем
слова
сложные
состав
способ
среды
термолизин
типами
фактор
фермент
функционирование
характеристика
хроматография
цикл
экспрессия
энтомопатогенн
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 44.192.95.161)
Яндекс.Метрика