ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ФОТОРИНА, НОВОГО БЕЛКОВОГО ИНГИБИТОРА ПРОТЕАЗ ИЗ ЭНТОМОПАТОГЕННОЙ БАКТЕРИИ Photorhabdus laumondii

Аннотация:

Энтомопатогенные бактерии рода Photorhabdus секретируют протеазу S (PrtS), которая рассматривается как фактор вирулентности. Нами обнаружено, что в геномах Photorhabdus непосредственно за генами prtS расположены гены, которые кодируют небольшие гипотетические белки, гомологичные эмфорину, открытому недавно белковому ингибитору металлопротеаз. Ген эмфориноподобного ингибитора из Photorhabdus laumondii subsp. laumondii TT01 был клонирован и экспрессирован в клетках Escherichia coli. Рекомбинантный белок, названный фоторином (Phin), очищен с помощью металл-хелатной аффинной и гельпроникающей хроматографии и охарактеризован. Установлено, что Phin является мономером и ингибирует активность протеализина и термолизина, относящихся, как и PrtS, к семейству пептидаз М4. Константы ингибирования составили 1,0 ± 0,3 и 10 ± 2 мкМ соответственно. Продемонстрировано также, что Phin способен подавлять протеолитическую активность культуральной жидкости Р. laumondii (концентрация полумаксимального ингибирования 3,9 ± 0,3 нМ). Получены поликлональные антитела к Phin, и методом иммуноблоттинга показано, что Phin продуцируется клетками Р laumondii. Таким образом, гены prtS у энтомопатогенных бактерий рода Photorhabdus колокализованы с генами эмфориноподобных ингибиторов, которые, вероятно, регулируют активность фермента при инфекции. Строгая регуляция активности протеолитических ферментов является критической для функционирования всех живых систем. В то же время принципы регуляции активности протеаз белковыми ингибиторами остаются малоизученными. Бактериальные пары протеаза-ингибитор, такие как пара PrtS и Phin, являются многообещающей моделью для in vivo исследований этих принципов. Бактерии рода Photorhabdus имеют сложный жизненный цикл с несколькими хозяевами, являясь симбионтами нематод и мощными патогенами насекомых. Это даёт уникальную возможность использовать пару PrtS и Phin в качестве модели для изучения принципов регуляции активности протеаз белковыми ингибиторами в контексте взаимодействия бактерий с разными типами хозяев.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2023
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2023.-N 9.-С.1642-1654. Библ. 50 назв.
Просмотров: 16