Разработка тест-системы на основе иммуноферментного анализа для детекции рекомбинантного пневмолизина Streptococcus pneumoniae

Аннотация:

Пневмолизин (Ply) - гемолитический токсин Streptococcus pneumoniae (5. pneumoniae), экспрессируемый всеми штаммами пневмококка. Для его качественного и количественного определения в биологических жидкостях простым, быстрым и эффективным способом может быть использование сэндвич-ИФА (иммуноферментного анализа). Цель исследования - разработать и оценить специфичность сэндвич-ИФА тест-системы для качественного и количественного определения рекомбинантного Ply (rPly) S. pneumoniae. Материалы и методы. В качестве распознающих антител в сэндвич-ИФА использовали кроличьи поликлональные антитела (ПкАТ) к rPly, иммобилизованные на твердой фазе. К ПкАТ (rPly) прибавляли исследуемые антигены (АГ). Реакцию проявляли детектирующими мышиными моноклональными иммуноглобулинами - IgGl (rPly) - антителами, конъюгированными с пероксидазой корня хрена. Специфичность тест-системы оценивали при использовании в качестве референс-препаратов рекомбинантного а-гемолизина (ra-Hly) и водорастворимых АГ Staphylococcus aureus (5. aureus). Результаты. С помощью сэндвич-ИФА rPly выявлен в концентрации 0,15 мкг/мл. Тест-система характеризовалась специфичностью, что подтверждено отсутствием реакции с ra-Hly S. aureus. Референс-препараты водорастворимых поверхностных АГ штаммов S. aureus № 209,1986,1991 и Cowan I давали ложноположительную реакцию за счет присутствия в их составе протеина A (SpA) - термостабильного поверхностного белка, экспрессируемого многими штаммами стафилококка, способного связывать иммуноглобулины через Fc-фрагмент или Fab-фрагменты V3H домена В-клеточного рецептора. Отрицательная реакция получена с АГ из штамма 5. aureus Wood 46, не имеющего гена spa, кодирующего экспрессию SpA. Присутствие SpA в препаратах водорастворимых АГ S. aureus подтверждено в реакции ингибирования при ИФА. Заключение. Разработан сэндвич-ИФА для качественного и количественного определения Ply S. pneumoniae. Проведенные исследования подтвердили специфичность тест-системы.

Авторы:

Издание: Российский биотерапевтический журнал
Год издания: 2023
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2023.-N 4.-С.52-59. Библ. 25 назв.
Просмотров: 14