АМПЛИФИКАЦИЯ кДНК ВАРИАБЕЛЬНЫХ ДОМЕНОВ АНТИТЕЛ, ПРОИЗВОДИМЫХ ЕДИНИЧНЫМИ В-КЛЕТКАМИ ЧЕЛОВЕКА, ДЛЯ СОЗДАНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

Аннотация:

Описан способ создания генетических конструкций для получения из единичных клеток рекомбинантных человеческих антител. Процесс начинают с изоляции В-лимфоцитов из периферической крови человека с помощью цитометрического сортинга, затем выполняют синтез первой цепи кДНК по технологии SMART с последующей полнотранскриптомной амплификацией, после чего проводят амплификацию участков, которые кодируют вариабельные (VH, Vk и VX) домены иммуноглобулина G. Для этого нами предложено использовать 28 синтетических праймеров с суммарным числом нуклеотидов 924, включая некомплементарные вспомогательные 5’-участки. Конструкция праймеров обеспечивает получение пары линейных экспрессионных кассет для тяжелой и легкой цепи каждого тестируемого антитела из пары успешно амплифицированных полинуклеотидов с помощью сплайсинговой ПЦР. Совместная трансфекция линейных экспрессионных кассет в перевиваемые клетки млекопитающих позволяет синтезировать полноразмерный иммуноглобулин, специфичность и нейтрализующую способность которого можно быстро оценить в соответствующих тестах. В дальнейшем открытые рамки считывания цепей антитела можно клонировать в плазмидные векторы для создания стабильной экспрессирующей клеточной линии.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2023
Объем: 15с.
Дополнительная информация: 2023.-N 1.-С.12-26. Библ. 21 назв.
Просмотров: 14