ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ РЕПОРТЕРЫ turboGFP И turboRFP ДЛЯ ОЦЕНКИ ПРОМОТОРОВ В Escherichia coli: ВОЗМОЖНОСТИ И ОГРАНИЧЕНИЯ

Аннотация:

Флуоресцентные белки — удобные репортеры, широко используемые в бактериях. Однако сегодня недостаточно информации о возможностях и ограничениях их использования для разработки и оптимизации экспрессионных кассет при конструировании бактериальных продуцентов для биотехнологии. В статье описаны особенности сверхэкспрессии генов зеленого и красного флуоресцентных белков: turboGFP и turboRFP соответственно — в Escherichia coli под контролем регулируемого изопропил-бета-D-1-тиогалактопиранозидом (ИПТГ) фагового промотора Т5. Оба белка синтезируются в основном в растворимой форме и обладают заметной цитотоксичностью, которая при сверхэкспрессии в присутствии ИПТГ приводит к задержке роста культур и накоплению клонов, не синтезирующих исследуемые белки. При одинаковых условиях культивирования накопление таких клонов для turboRFP выражено сильнее, чем для turboGFP. При сниженном уровне экспрессии (в отсутствие ИПТГ) указанные эффекты снижаются (для turboRFP) или не проявляются вообще (для turboGFP). Обсуждены возможные причины цитотоксичности исследованных белков для клеток Е. coli. Предложены практические рекомендации по использованию генов исследованных белков в качестве репортерных при разработке экспрессионных кассет. В частности, определен уровень продукции исследуемых белков, при котором не наблюдается негативных эффектов, и указаны возможности и ограничения метода цитофлуориметрической сортировки клеток при разработке штаммов-продуцентов.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2023
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2023.-N 4.-С.39-49. Библ. 21 назв.
Просмотров: 19