ЛИОФИЛИЗАЦИЯ ФЕРМЕНТОВ ДЛЯ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

Аннотация:

Полимераза и обратная транскриптаза (ревертаза) являются ключевыми компонентами полимеразной цепной реакции. На стабильность этих ферментов и, как следствие, на работоспособность наборов реагентов для полимеразной цепной реакции влияет множество внешних факторов, главный из которых — температурный режим хранения ферментов. Как правило, производители наборов рекомендуют длительное хранение ферментов при температуре — 20°С. В данной работе исследовано влияние лиофилизации на изменение активности ферментов для полимеразной цепной реакции, хранившихся при комнатной температуре. При сравнительном изучении криопротекторов — декстрана, сахарозы и трегалозы установлено, что последняя помогает сохранить активность обоих ферментов в процессе лиофилизации. Подобрана оптимальная концентрация трегалозы и оценено влияние декстрана на активность ферментов. Полимеразную и ревертазную активности ферментов определяли с помощью нерадиоактивных методик, основанных на применении флуоресцентных красителей. Этот способ позволяет быстрее и объективнее охарактеризовать фермент, чем тестирование методом полимеразной цепной реакции. По сравнению с полимеразной цепной реакцией чувствительность методик измерения ферментативной активности выше, поскольку с их помощью можно увидеть ее снижение на 10—20%. Лиофилизованные полимеразу и обратную транскриптазу можно транспортировать без "холодовой цепи" при комнатной температуре и после получения хранить при температуре 2—8°С. Это упрощает процедуру доставки наборов реагентов и снижает затраты на их транспортировку.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2023
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2023.-N 4.-С.50-54. Библ. 8 назв.
Просмотров: 15