ОПТИМИЗАЦИЯ СТРУКТУРЫ СНАР-ДОМЕНА ЭНДОЛИЗИНА ФАГА К БАКТЕРИЙ Staphylococcus aureus С ЦЕЛЬЮ ПОВЫШЕНИЯ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

Аннотация:

С целью повышения литической активности фермента разработаны структуры рекомбинантного модифицированного СНАР-домена эндолизина фага К Staphylococcus aureus, включающие (начиная с N-конца) последовательность различных катионных пептидов НВ(Х), слитую с последовательностью СНАР-домена через линкерную область GSG4S. Получены генно-инженерные конструкции, кодирующие новые НВ(Х)-СНАР, которые были клонированы и экспрессированы в реципиентный штамм Е. coll BL21(DE3). Все варианты НВ(Х)-СНАР, а также контрольный вариант СНАР-домена, были выделены и очищены с помощью единой методики, включающей комбинацию катионо- и анионообменной хроматографий. Изучена литическая активность полученных ферментов турбидиметрическим методом по автоклавируемой культуре 5. aureus. Для двух наиболее перспективных с точки зрения дальнейшего использования вариантов НВ(Х)-СНАР определены основные физико-химические характеристики. Показано, что наличие линкерного участка GSG4S в структуре молекулы привело как минимум к двукратному увеличению ее активности, в то время как наличие катионных пептидов в составе молекулы не оказало положительного действия на литическую активность эндолизина против золотистого стафилококка. Полученные данные позволят более рационально подойти к вопросу выбора подходов к оптимизации структуры в будущем и расширят возможности для конструирования эндолизинов с целью создания эффективного лекарственного средства.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2023
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2023.-N 6.-С.52-62. Библ. 25 назв.
Просмотров: 13