Цитопатогенное действие нативного пневмолизина Streptococcus pneumoniae на клетки линии СНО-К1

Аннотация:

Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae, пневмококк) - условно-патогенные бактерии, вызывающие воспалительные заболевания у человека. Одним из факторов вирулентности S. pneumoniae является пневмолизин (Ply) - холестеролзависимый гемолитический токсин, который при взаимодействии с холестерином клеточных мембран эукариотов формирует поры и приводит к разрушению и гибели клеток. Цель исследования - иммунохимическая характеристика Ply и оценка его цитотоксического действия в культуре клеток яичника китайского хомячка СНО-К1. Материалы и методы. Для получения Ply штамм S. pneumoniae серотипа 3 культивировали в сердечно-мозговом бульоне, осаждали бактериальные клетки центрифугированием и подвергали ультразвуковой дезинтеграции. Наличие Ply в полученном препарате подтверждали с помощью иммуноблоттинга с моноклональными антителами к рекомбинантному Ply. Цитопатогенное действие Ply исследовали на культуре пролинзависимых эпителиоподобных клеток яичника китайского хомячка СНО-К1 в среде RPMI-1640. Гемолитическую активность Ply оценивали в реакции с эритроцитами мыши. Результаты. Методом ультразвуковой дезинтеграции клеток штамма S. pneumoniae серотипа 3 с последующим осаждением сульфатом аммония получен белок, образующий на электрофорезе полосу, соответствующую молекулярной массе Ply (53 кДа). Полученный белок обладал способностью лизировать эритроциты мыши. Подлинность Ply подтверждена в иммуноблоттинге с моноклональными антителами к рекомбинантному Ply. Ply оказывал цитопатогенное действие на клетки яичника китайского хомячка СНО-К1. Минимальная доза препарата, индуцирующая токсическое действие на клетки, проявляющаяся в появлении наряду с нормальными клетками округлых и мелких клеток, составляла 16,4 мкг/мл по белку. При увеличении концентрации до 65,6 мкг/мл обнаруживали только мелкие круглые клетки. Дальнейшее увеличение концентрации приводило к полной деструкции клеток СНО-К1. Заключение. Пневмолизин можно использовать для разработки новых лекарственных средств, предназначенных для терапии пневмококковых инфекций.

Авторы:

Издание: Российский биотерапевтический журнал
Год издания: 2024
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2024.-N 1.-С.51-57. Библ. 14 назв.
Просмотров: 10