ПРИМЕНЕНИЕ ТЕХНОЛОГИИ DETECTR ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОЙ ДЕТЕКЦИИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ФИТОПАТОГЕНА Dickeya solani С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕКОМБИНАНТНОЙ CRISPR-НУКЛЕАЗЫ Cas12a, ПОЛУЧЕННОЙ ОДНОСТАДИЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ ОЧИСТКОЙ

Аннотация:

В работе показано, что рекомбинантная CRISPR-нуклеаза Cas12a, полученная упрощенным методом очистки после ее гетерологической экспрессии с применением одностадийной металл-хелатной хроматографии, может быть успешно использована в технологии DETECTR. Полученная таким способом CRISPR-нуклеаза Cas12a в комбинации с рекомбиназной полимеразной амплификацией позволила обеспечить селективность детекции Dickeya solani — опасного фитопатогена, вызывающего заболевание картофеля, известное как “черная ножка”, с пределом обнаружения 1 копия бактериального генома на реакцию амплификации. Результат может быть определен визуально, без использования сложных инструментальных методов, по изменению окраски реакционной пробы при освещении синим светом, что создало основу для разработки полевой ДНК-диагностики D. solani. Применение упрощенной хроматографической очистки позволит существенно снизить затраты времени и ресурсов, необходимые для получения функционально активной CRlSPR-нуклеазы Cas12a, при разработке и производстве ДНК-диагностикумов на основе технологии DETECTR.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2024
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2024.-N 1.-С.20-28. Библ. 23 назв.
Просмотров: 1