Определение генетических детерминант устойчивости штаммов Mycobacterium Ieprae к антимикробным препаратам методом минисеквенирования

Аннотация:

Цель. Разработать метод выявления генетических детерминант устойчивости клинических изолятов Mycobacterium Ieprae к трем группам антимикробных препаратов: дапсону, рифампицину и фторхинолонам. Материалы и методы. B работе использовали клинические изоляты M. Ieprae, полученные от пациентов, находящихся на лечении в Сергиево-Посадском филиале «ГНЦЦК» Минздрава России с диагнозами «Лепра. Лепроматозный тип», «Лепра мультибактериальная, пограничная форма». Выделение тотальной ДНК из анализируемых образцов после их гомогенизации проводили с использованием набора «Проба-НК» (Россия). Выбор последовательностей олигонуклеотидов и гибридизационных зондов для амплификации участков генома M. Ieprae, потенциально содержащих детерминанты резистентности, осуществлен согласно информации портала BLAST, а их синтез выполнен OOO «Синтол» (Россия). Первый этап амплификации целевых фрагментов генома M. Ieprae проведен с использованием набора «QIAGEN Multiplex PCR kit» (Германия), а последующее минисеквенирование - с использованием набора «SNaPshot» на приборе ABI 3130 GeneticAnaIyser (Applied Biosystems, США). Анализ полученных данных проводили с использованием Peak Scanner Software. Результаты. Разработан метод минисеквенирования, позволяющий одновременно выявлять шесть наиболее распространенных генетических детерминант устойчивости M. Ieprae к антимикробным препаратам непосредственно в кожном биоптате пациента. Анализируемые детерминанты расположены в участках, определяющих возникновение резистентности к дапсону - в геномном локусе folP1 (T53, P55), рифампицину - в гене rpoB (D441, H451, S456) и фторхинолонам - в гене gyrA (A91). Контрольной реакцией, подтверждающей присутствие M. Ieprae в биоптате кожи, является ПЦР с использованием праймеров к некодирующему повторяющемуся элементу генома лепры RLEP. Апробация метода на образцах клинического материала от пациентов больных лепрой показала отсутствие значимых детерминант устойчивости M. Ieprae к антимикробным препаратам, наиболее часто используемым для терапии данного заболевания. Выводы. Система быстрой идентификации устойчивости M. Ieprae к антимикробным препаратам представляется важным инструментом для персонализации медицинской помощи больным лепрой с возможностью выбора оптимальной схемы химиотерапии.

Авторы:

Издание: Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия
Год издания: 2024
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2024.-N 1.-С.79-86. Библ. 19 назв.
Просмотров: 2