Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

Мультиплексная ПЦР в режиме реального времени для выявления генов qacA/B и smr у грамположительных бактерий


Аннотация:

Дезинфицирующие вещества (ДВ) являются эффективными средствами неспецифической профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи. Нарушение режимов применения ДВ приводит к формированию устойчивости микроорганизмов к ним. Для целей мониторинга распространения клинически значимых микроорганизмов, устойчивых к ДВ, остаётся актуальной разработка методов их выявления, в том числе молекулярно-генетических. Целью исследования была разработка мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для выявления у грамположительных бактерий генов qacA/B и smr—детерминант устойчивости к ДВ из группы катионных поверхностно-активных веществ (КПАВ). Материалы и методы. Поиск консервативных участков генов qacA, qacB и smr и разработку праймеров и зондов проводили с помощью программ BLASTN, GeneRunner и Multiple Primer Analyzer. Для оценки аналитической чувствительности мультиплексной ПЦР-РВ были сконструированы плазмиды pTZ57-qacA/B, pTZ57-smrn pTZ57-16S, содержащие фрагменты генов qacA/В, smr и 16S рРНК длиной 197, 127 и 287 п.н. соответственно. Апробацию метода проводили с использованием клинических изолятов грамположительных бактерий (п=30). Результаты. Разработана мультиплексная ПЦР-РВ с использованием зондов TaqMan для выявления генов qacA/В и smr у грамположительных бактерий. В качестве внутреннего контроля амплификации был использован ген 16S рРНК. Чувствительность мультиплексной ПЦР-РВ составила 10 в 3 степени копий для всех генов. Апробация мультиплексной ПЦР-РВ показала, что гены qacA/В присутствовали у 30% исследованных изолятов, smr—у 10%. Воспроизводимость результатов тестирования составила 100%. Специфичность разработанной мультиплексной ПЦР-РВ составила 100%. Заключение. Разработанная мультиплексная ПЦР-РВ характеризуется высокой специфичностью и быстротой анализа, а также наличием внутреннего контроля амплификации и может быть использована для выявления грамположительных бактерий, потенциально устойчивых к ДВ из группы КПАВ, при проведении молекулярно-генетических исследований.

Авторы:

Ковальчук С.Н.
Архипова А.Л.
Ковылкова С.Ю.
Ильина Е.Н.
Федорова Л.С.

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2024
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2024.-N 5.-С.692-698. Библ. 25 назв.
Просмотров: 1

Рубрики
Ключевые слова
gene
амплификация
анализ
аналитический
апробация
бактерии
болезни
вещество
внутренняя
воспроизводимость
временная
выявление
ген
генетика
генов
гены
грамположительные
групп
дезинфектанты
дезинфицирующие
длина
зондовое
изоляты
инфекцией
инфекционные
использование
использованием
исследование
исследования
катионы
качества
клиническая
консервативная
контроль
лекарственная
медицинская
метод
методов
микробиологи
микроорганизмов
молекулярная
мониторинг
нарушения
неспецифическая
оказание
оценка
плазмида
поверхностноактивные
полимеразная
помощи
потенциальный
применение
проведение
профилактика
пцр
разработка
распространение
реакцией
реакция
режим
результата
связанные
содержащая
специфичность
средства
степени
тестирование
устойчивое
устойчивости
устойчивость
участковый
формирование
фрагмент
характер
цепная
чувствительность
эффективный
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 10.2.144.78)
Яндекс.Метрика