Мультиплексная ПЦР в режиме реального времени для выявления генов qacA/B и smr у грамположительных бактерий

Аннотация:

Дезинфицирующие вещества (ДВ) являются эффективными средствами неспецифической профилактики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи. Нарушение режимов применения ДВ приводит к формированию устойчивости микроорганизмов к ним. Для целей мониторинга распространения клинически значимых микроорганизмов, устойчивых к ДВ, остаётся актуальной разработка методов их выявления, в том числе молекулярно-генетических. Целью исследования была разработка мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для выявления у грамположительных бактерий генов qacA/B и smr—детерминант устойчивости к ДВ из группы катионных поверхностно-активных веществ (КПАВ). Материалы и методы. Поиск консервативных участков генов qacA, qacB и smr и разработку праймеров и зондов проводили с помощью программ BLASTN, GeneRunner и Multiple Primer Analyzer. Для оценки аналитической чувствительности мультиплексной ПЦР-РВ были сконструированы плазмиды pTZ57-qacA/B, pTZ57-smrn pTZ57-16S, содержащие фрагменты генов qacA/В, smr и 16S рРНК длиной 197, 127 и 287 п.н. соответственно. Апробацию метода проводили с использованием клинических изолятов грамположительных бактерий (п=30). Результаты. Разработана мультиплексная ПЦР-РВ с использованием зондов TaqMan для выявления генов qacA/В и smr у грамположительных бактерий. В качестве внутреннего контроля амплификации был использован ген 16S рРНК. Чувствительность мультиплексной ПЦР-РВ составила 10 в 3 степени копий для всех генов. Апробация мультиплексной ПЦР-РВ показала, что гены qacA/В присутствовали у 30% исследованных изолятов, smr—у 10%. Воспроизводимость результатов тестирования составила 100%. Специфичность разработанной мультиплексной ПЦР-РВ составила 100%. Заключение. Разработанная мультиплексная ПЦР-РВ характеризуется высокой специфичностью и быстротой анализа, а также наличием внутреннего контроля амплификации и может быть использована для выявления грамположительных бактерий, потенциально устойчивых к ДВ из группы КПАВ, при проведении молекулярно-генетических исследований.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2024
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2024.-N 5.-С.692-698. Библ. 25 назв.
Просмотров: 1