УДЛИНЕНИЕ ЛИНКЕРНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ МЕЖДУ АНТИГЕН-УЗНАЮЩИМИ МОДУЛЯМИ ОБЕСПЕЧИВАЕТ БОЛЕЕ ЭФФЕКТИВНУЮ НАРАБОТКУ БИСПЕЦИФИЧНЫХ НАНОАНТИТЕЛ B ПЕРИПЛАЗМЕ E. coli

Аннотация:

Использование технологии получения однодоменных антител (молекул NANOBODY®, также обозначаемых как наноантитела, нАТ, или молекул на основе других стабильных белковых структур) и их производных для решения актуальных задач биомедицины становится всё более популярным. Действительно, формат одного небольшого хорошо растворимого белка со стабильной структурой, полнофункционального в плане специфического узнавания, очень удобен как модуль для создания мультивалентных, би-/олигоспецифичных таргетных генно-инженерных молекул и структур. Наработка нАТ в периплазме бактерии E. coli является очень удобным и достаточно универсальным способом получения аналитических количеств нАТ для первичного изучения свойств этих молекул и выбора наиболее перспективных вариантов. Сложнее пока обстоит дело с наработкой в таких же условиях би- и мультивалентных производных первично отбираемых нАТ. B данной работе разработаны и применены удлинённые линкерные последовательности (52 и 86 a.o.) между антиген-узнающими модулями в клонируемых экспрессионных конструкциях с целью повышения эффективности наработки биспецифичных наноантител (бсНТ) в периплазме бактерий E. coli. Три варианта модельных бсНТ, описанные в этом исследовании, были наработаны в периплазме бактерий и выделены в растворимом виде с сохранением функциональности всех белковых доменов. Если ранее наши попытки наработать в периплазме бсНТ с традиционными линкерами длиной не более 30 a.o. были безуспешными, то применённые здесь удлинённые линкеры обеспечили существенно более эффективную наработку бсНТ, сравнимую по эффективности с традиционной наработкой исходных мономерных нАТ. Использование сильно удлинённых линкеров, предположительно, может быть полезным для повышения эффективности наработки также и других бсНТ, и подобных им молекул в периплазме бактерий E. coli.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2024
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2024.-N 5.-С.920-928. Библ. 29 назв.
Просмотров: 1