ФОРМИРОВАНИЕ АМИЛОИДОПОДОБНЫХ КОНФОРМАЦИОННЫХ СОСТОЯНИЙ бета-СТРУКТУРНЫХ МЕМБРАННЫХ БЕЛКОВ HA ПРИМЕРЕ ПОРИНА OmpF НАРУЖНОЙ МЕМБРАНЫ Yersinia pseudotuberculosis

Аннотация:

B работе приведены результаты исследования in vitro и in silico процесса образования амилоидоподобных структур в жестких денатурирующих условиях неспецифическим порином OmpF Yersinia pseudotuberculosis (YpOmpF) - мембранным белком, имеющим конформацию бета-бочонка. Показано, что для получения амилоидоподобных агрегатов порина необходима предварительная дестабилизация его структуры в буферном растворе с кислым значением pH при повышенной температуре с последующей длительной инкубацией при комнатной температуре. После нагревания при 95 oC в растворе с pH 4,5 в молекуле порина на уровне третичной и вторичной структуры белка наблюдаются существенные конформационные перестройки, которые сопровождаются увеличением содержания суммарной бета-структуры и резким уменьшением величины характеристической вязкости раствора белка. Последующее длительное выдерживание полученного нестабильного интермедиата YpOmpF при комнатной температуре приводит к формированию разнообразных по форме и размерам агрегатов порина, связывающих тиофлавин T (специфический флуоресцентный краситель для обнаружения амилоидоподобных белковых структур). Показано, что, по сравнению с исходным белком, ранние промежуточные продукты амилоидогенного пути порина, олигомеры, обладают повышенной токсичностью по отношению к клеткам нейробластомы мыши Neuro-2aCCL-131™. Результаты компьютерного моделирования и анализа изменения собственной флуоресценции при агрегации белка позволяют предположить, что при образовании амилоидоподобных агрегатов изменения в структуре YpOmpF затрагивают не только участки с внутренне неупорядоченной структурой, соответствующие наружным петлям порина, но и основной каркас молекулы, имеющий жесткую пространственную структуру, присущую бета-бочонку.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2024
Объем: 17с.
Дополнительная информация: 2024.-N 6.-С.1070-1086. Библ. 72 назв.
Просмотров: 1