ГЕННО-ИНЖЕНЕРНЫЙ СИНТЕЗ МУТАНТНОГО ДИФТЕРИЙНОГО ТОКСИНА CRM197: ВЛИЯНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ГЕТЕРОЛОГИЧНОЙ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА В КЛЕТКАХ Е. coli

Аннотация:

CRM197 (Cross Reacting Material 197) представляет собой неактивную форму экзотоксина Corynebacterium diphtheriae, используемого в качестве белка-носителя для производства конъюгированных полисахаридных вакцин и иммунотерапевтических препаратов. Развитие данных направлений требует разработки эффективной и рентабельной технологии получения CRM197 требуемого качества. Разработан высокоэффективный метод получения рекомбинантного CRM197 в виде гибрида с белком-партнером SUMO в клетках Е. coli, позволяющий синтезировать более 3 г/л в виде телец включения. Было показано существенное влияние типа экспрессионного вектора, условий гетерологичной экспрессии гена и культивирования продуцента на его растворимость. В результате снижения температуры культивирования и использования промотора гена, кодирующего белок теплового шока CspA, а количество растворимого SUMO-CRM197 составило более 30% от общего белка при уровне биосинтеза около 2 г/л. Коэкспрессия целевого гена с геном дисульфид-изомеразы DsbC Е. coli, позволила получить целевой белок полностью в растворимом состоянии и выходом более 1.4 г/л. Полученные результаты могут стать основой для разработки перспективной отечественной технологии получения CRM197.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2024
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2024.-N 4.-С.392-402. Библ. 20 назв.
Просмотров: 3