РАЗРАБОТКА МЕТОДА ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИЗОЦИМА ИЗ СЛЮНЫ ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Растущая антибиотикорезистентность диктует необходимость поиска альтернативных антимикробных препаратов. Среди перспективных прототипов - антимикробные полипептиды, в том числе лизоцим. Существующие методы выделения лизоцима человека менее разработаны в сравнении с методами получения лизоцима из других видовых источников. Цель исследования - разработка простого и быстрого метода выделения лизоцима из слюны человека, который может быть реализован в условиях лабораторий, специализирующихся на биохимии пептидов и низкомолекулярных белков. Материал и методы. Слюну человека обрабатывали NaCI, центрифугировали, пропускали через фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, подвергали двухступенчатой твердофазной экстракции на картриджах С18 (элюция 20%-ным и 60%-ным ацетонитрилом), а также обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке С18 в градиенте ацетонитрила и рехроматографии. Гомогенность и соответствие молекулярной массы лизоцима подтверждали электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Ферментативную активность устанавливали с помощью турбидиметрического анализа в присутствии Micrococcus lysodeikticus. Наличие антимикробной активности выявляли методом наложения геля после электрофореза в кислой системе на гель с бактерией Listeria monocytogenes. Результаты. Обработка слюны 62,5-1000 мМ NaCI не влияла на содержание общего белка в супернатантах после центрифугирования. Обработанную 0,5 М NaCI и профильтрованную слюну подвергали двухступенчатой твердофазной экстракции. После отделения компонентов, элюирующихся 20%-ным ацетонитрилом, использовали компоненты, элюирующиеся при 60% ацетонитрила, для проведения высокоэффективной жидкостной хроматографии, в результате которой получили мажорный пик. Фракции, соответствующие мажорному пику, использовали для дополнительной очистки и анализа. Полученный препарат содержал белок, по молекулярной массе соответствующий лизоциму. Белок обладал мурамидазной активностью в отношении клеточных стенок М. lysodeikticus и антимикробной активностью в отношении L. monocytogenes. Выводы. В настоящей работе удалось разработать простой метод выделения лизоцима из слюны человека (около 5 мкг очищенного белка из 1 мл слюны). Протокол сохраняет важнейшие биологические свойства лизоцима.

Авторы:

Издание: Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Год издания: 2025
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2025.-N 2.-С.40-47. Библ. 17 назв.
Просмотров: 1