МЕТОД in vivo БИОТИНИЛИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ ВИРУСА НАТУРАЛЬНОЙ ОСПЫ

Аннотация:

В работе реализован метод специфического in vivo биотинилирования рекомбинантных белков М1 и В7 вируса натуральной оспы при биосинтезе в клетках СНО-К.1. Для этого проводили коэкспрессию биотин-лигазы BirA и целевых генов, кодирующих эктодомены белков M1 и В7 с С-концевым avitag в клетках СНО-К1 в присутствии биотина в культуральной среде. Оптимальная концентрация биотина для экспрессии белков М1 и В7 составила 125 мкМ. Продукция биотинилированных рекомбинантных белков была осложнена низким выходом. Для повышения продукции целевых белков в культуральную среду добавляли низкомолекулярные энхансеры: лития ацетат, натрия вальпроат и кофеин. Энхансеры увеличивали продукцию целевого белка в 1.3—4.9 раза и не оказывали негативного влияли на выход биотинилированного белка. Наиболее высокий выход биотинилированного белка достигался при одновременном добавлении лития ацетата в концентрации 10 мМ и натрия вальпроата 2.5 мМ. Полученные таким образом белки могут быть использованы для сортировки специфических В-лимфоцитов.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2024
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2024.-N 5.-С.552-560. Библ. 39 назв.
Просмотров: 1