ВЛИЯНИЕ ДНК-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ НА ФЕРМЕНТАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ ТЕРМИНАЛЬНОЙ ДЕЗОКСИНУКЛЕОТИДИЛТРАНСФЕРАЗЫ В СИСТЕМАХ С ГОМОПОЛИМЕРНЫМИ СУБСТРАТАМИ

Аннотация:

Проведено исследование влияния ДНК-связывающих белков EcSSB и Sso7d, стабилизирующих одноцепочечную и двуцепочечную ДНК соответственно, на активность терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (TdT) in vitro. В качестве субстрата использовали гомополимеры Тn, не склонные к образованию вторичных структур. Внесение в реакционную смесь EcSSB приводило к существенному повышению активности TdT и смещению спектра образующихся продуктов в сторону более протяженных олигонуклеотидов, а максимальный эффект наблюдался в близком к эквимолярному стехиометрическом соотношении (EcSSB)4:TdT в присутствии катионов Мn2+. Присутствие Sso7d в реакционной смеси приводило к небольшому (до 15%) снижению активности TdT для субстратов Т5 и Т15 и более выраженному для Т35 (до 30%). При этом катионы Со2+ снижали ингибирующий эффект Sso7d. Продемонстрированное в данной работе влияние ДНК-связывающих белков на активность TdT, а также установленные закономерности, могут найти применение как в белковой инженерии при создании гибридных мультидоменных белков на основе TdT, так и при разработке новых принципов ферментативного de novo синтеза ДНК.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2024
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2024.-N 6.-С.589-601. Библ. 32 назв.
Просмотров: 1