СИСТЕМА КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ПРОБОПОДГОТОВКИ И РЕЗУЛЬТАТОВ АНАЛИЗА ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ В И С МЕТОДОМ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ

Аннотация:

При проведении диагностических исследований на вирусоносительство критическое значение имеет предотвращение получения ложноотрицательных результатов. Для этого необходимо тщательно контролировать как все этапы процесса пробоподготовки, так и качество проведения самой диагностической реакции. Цель работы - создание оптимального сочетания экзогенного контроля качества пробоподготовки и систем для детекции вирусов гепатитов В и С методом мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени для улучшения точности, воспроизводимости и надежности результатов. Материал и методы. Объект исследования - выделенная ДНК вируса гепатита В и РНК вируса гепатита С из образцов плазмы крови от пациентов с подтверждёнными диагнозами. Для выполнения исследования in silica использовали: онлайн-ресурс Primer-BLAST, интегрированный в базу данных NCBI; онлайн-сервис OligoAnalyzer Tool Oligo 7 (Integrated DNA Technologies), a также программы Oligo Primer Analysis Software, Clustal Omega и UGENE. Для проведения ПЦР в реальном времени применяли амплификатор CFX96 Touch (Bio-Rad Laboratories, США). В ходе работы использовали набор для выделения нуклеиновых кислот МагноПлюс-НК-Био (ГК «Алкор Био», Россия). Процесс автоматического выделения проводили на станции Auto-Pure96 (Allsheng, Китай). ПЦР осуществляли с помощью наборов «Интифика ВГВ» и «Интифика ВГС» (ГК «Алкор Био», Россия). Результаты. Разработана стабильная и устойчивая мультиплексная ПЦР-система для контроля качества пробоподготовки и диагностики вирусных гепатитов В и С при анализе плазмы крови человека. Показано, что использование термодинамического анализа при дизайне праймеров и зондов способствует повышению эффективности работы ПЦР-систем, а также повышает чувствительность и исключает ложноположительные результаты. Выводы. Тщательная оптимизация характеристик праймеров и зондов при сочетании детекции экзогенного внутреннего контроля и вирусов в мультиплексной реакции значительно улучшает точность, воспроизводимость и надежность результатов анализа.

Авторы:

Издание: Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Год издания: 2025
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2025.-N 3.-С.38-44. Библ. 10 назв.
Просмотров: 1