ДИЗАЙН ТЕРМОСТАБИЛЬНОГО МИНИ-ИНТЕИНА ДЛЯ ИНТЕИН-ОПОСРЕДОВАННОГО ВЫДЕЛЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ И ПЕПТИДОВ

Аннотация:

Данное исследование посвящено разработке термостабильных и термоактивируемых мини-интеинов на основе полноразмерного интеина DnaEl из Thermus thermophilus НВ27. В результате проведённого рационального дизайна на основе полноразмерного интеина путём внесения делеций были сконструированы мини-интеины TthDnaE1 Д272, Д280 и Д287. Высокую эффективность сплайсинга наблюдали для Tt/iDnaEl Д272 и Д280 при температурах выше 50°C. Наиболее активный мини-интеин с делецией Д280 выбрали в качестве основы для создания самоотщепляющегося носителя аффинных меток путём точечного мутагенеза. Осуществлены мутации C1A, D405G и C1A/D405G, направленные на устранение возможности отщепления А-концевого экстеина и лигирования экстеинов. В результате максимальную эффективность отщепления С-экстеина наблюдали при температуре 60°C у мини-ингеина Д280 с двойной мутацией С1А/ D405G. Таким образом, нами были сконструированы термостабильные и термоактивируемые мини-интеины, способные к эффективному белковому сплайсингу или отщеплению С-концевого экстеина. Созданный мини-интеин TthDnaE1 Д280 C1A/D405G может служить основой для разработки новой экспрессионной системы, предназначенной для интеин-опосредованного получения рекомбинантных белков и пептидов медицинского назначения.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2025
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2025.-N 6.-С.884-895. Библ. 33 назв.
Просмотров: 1