NANOLuc/h-ЦЕЛЕНТЕРАЗИН: ЭФФЕКТИВНАЯ ПАРА ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ IN VITRO И IN VIVO

Аннотация:

Биолюминесцентное мечение опухолевых клеток становится стандартом при проведении доклинических исследований новых противораковых препаратов. Несмотря на разнообразие люцифераз, многие из них не подходят для прижизненной визуализации. Цель: сравнить различные субстраты NanoLuc in vitro, а также показать возможность использования пары Nluc/h-целентеразин для прижизненной визуализации диссеминированных опухолевых клеток с помощью системы IVIS Spectrum. Материалы и методы. Получение целевой клеточной линии и Т-клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы (Chimeric antigen receptor, CAR), осуществляли методом лентивирусной трансдукции клеток, измерение люминесценции производили планшетным люминометром «Luminoskan Microplate Luminometer», для in vivo визуализации в экспериментальной модели CAR Т-клеточной терапии на мышах линии NSG использовалась сйстема прижизненной визуализации IVIS Spectrum. Результаты. Проведено сравнение различных субстратов в тестах in vitro по сопоставлению яркости и стабильности люминесценции, а также показана возможность использования h-целентеразина в паре с люциферазой Nluc для прижизненной визуализации клеток в мышах. Получена генетически модифицированная клеточная линия Nalm6-NLuc-copGFP. Заключение. Полученные результаты сравнения различных субстратов для люциферазы Nluc в тестах п vitro и in vivo позволили определить оптимальную пару фермент/субстрат, которая может быть востребована в качестве инструмента для исследований эффективности, безопасности и токсичности соединений и клеточных продуктов, разрабатываемых для противоопухолевой терапии. Плазмидная конструкция, кодирующая Nluc, может быть использована для модификации других клеточных линий, необходимых для разработки и характеризации новых генно-терапевтических подходов.

Авторы:

Издание: Гематология и трансфузиология
Год издания: 2025
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2025.-N 2.-С.146-155. Библ. 31 назв.
Просмотров: 1