КОМБИНИРОВАННЫЕ СИСТЕМЫ РЕКОМБИНАЗНОЙ ПОЛИМЕРАЗНОЙ АМПЛИФИКАЦИИ И МЕМБРАННОЙ ИММУНОХРОМАТОГРАФИИ ИЛИ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК БАКТЕРИЙ Salmonella enterica

Аннотация:

Разработаны и исследованы комбинированные биоаналитические системы для детекции бактерий Salmonella enterica в молоке. Эти системы основаны на изотермической рекомбиназной полимеразной амплификации (RPA) фрагмента гена invA и детекции полученных ампликонов ДНК, содержащих остатки биотина и флуоресцеина на противоположных концах экспрессной мембранной хроматографией на тест-полосках или иммуноферментным анализом (ИФА) в микропланшетах. Показано, что разработанные тест-системы специфичны, чувствительны и просты в применении. Для постановки RPA требуется 20 мин при температуре 40°С. Иммунохромографическое выявление ампликонов обеспечивает экспресс-тестирование в течение 10 мин и возможный визуальный учет результата. ИФА проходит в течение 75 мин, позволяет анализировать большое количество проб, а также количественно оценить результат. Установлено, что биоаналитические системы характеризуются широкой специфичностью в отношении различных серотипов бактерий 5. enterica подвида enterica, относящихся к серогруппам В, С, D и Е. Показано, что предел детекции геномной ДНК S. enterica в тест-системах составляет 0.5 фг. Предел обнаружения сальмонелл в искусственно загрязненных пробах молока составил 8 х 10 во 2 КОЕ/мл. После предварительного культивирования исследуемых проб в течение 6 ч этот показатель оказался равным 2 х 10 во 2 степени клеток на 25 г молока.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2025
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2025.-N 2.-С.194-206. Библ. 42 назв.
Просмотров: 0