ТВЕРДОФАЗНАЯ ПЦР HA ПЛЕНОЧНЫХ БИОЧИПАХ C ЯЧЕЙКАМИ ИЗ ЩЕТОЧНЫХ ПОЛИМЕРОВ, "ЛАБОРАТОРИЯ HA ЧИПЕ"

Аннотация:

Разработан многофакторный высокочувствительный анализ нуклеиновых кислот на биологических микрочипах в закрытой от внешней среды системе, без переноса биологического материала из одной емкости в другую и без добавления дополнительных компонентов в ходе выполнения анализа с целью уменьшения вероятности контаминации в ходе выполнения анализа и возможности автоматизации процесса. Подложки из пленочного полиэтилентерефталата (ПЭТ), используемые для изготовления биочипов, обрабатывали коронным разрядом; на поверхности подложки при вращении получали тонкий слой фотоактивного поливинилацетата; методом фотоинициируемой радикальной полимеризации мономеров "от поверхности" фотолитографически при УФ-облучении через фотомаску на поверхности получали матрицу ячеек из щеточных полимеров. Реактивные карбоксильные группы на полимерных цепях активировали, в ячейках биочипа иммобилизовали праймеры с С6-аминомодификацией на 5'-конце. Подложки с иммобилизованными в ячейках праймерами использовали для изготовления биочипов. B ячейках биочипа проводили ПЦР с удлинением иммобилизованных праймеров с контролем по встраиванию Су5-флуоресцентно-меченых нуклеотидов. Разработан метод анализа нуклеиновых кислот твердофазной ПЦР с удлинением иммобилизованных праймеров в закрытом пленочном биочипе при термоциклировании, с контролем по встраиванию Су5-флуоресцентно-меченых нуклеотидов методом цифровой флуоресцентной микроскопии по конечной точке. Разработан "пленочный" биочип, изготовленный из пленочного ПЭТ, с внутренней камерой, с ячейками из щеточных полимеров с иммобилизованными праймерами, с каналами для подачи и удаления растворов в камеру биочипа, с низкой теплоемкостью и высокой теплопроводностью тонких пленочных компонентов биочипа, с термоциклированием, с регистрацией результатов методом цифровой флуоресцентной микроскопии через крышку и слой промывной жидкости, не разбирая биочип, в изолированной от внешней среды системе, "лаборатория на чипе". Работоспособность метода и функциональная пригодность пленочного биочипа продемонстрированы при анализе образцов, содержащих ДНК патогенных бактерий Staphylococcus auereus и Legionella pneumophila. "Пленочные" биочипы из доступного пленочного ПЭТ с ячейками из щеточных полимеров представляются перспективными для дальнейшего совершенствования и использования твердофазной ПЦР в мультиплексном анализе нуклеиновых кислот для развития технологий микроанализа "лаборатория на чипе" и применения в клинических лабораториях.

Авторы:

Издание: Биоорганическая химия
Год издания: 2025
Объем: 15с.
Дополнительная информация: 2025.-N 4.-С.612-626. Библ. 27 назв.
Просмотров: 0