Модификация красного флуоресцентного белка TagRFP для уменьшения его иммуногенности при создании флуоресцирующих модельных опухолей иммунокомпетентных мышей Balb/C

Аннотация:

Длинноволновые флуоресцентные белки наиболее перспективны при исследованиях in vivo на флуоресцирующих моделях опухолей лабораторных животных. Если экспрессирующие флуоресцентные белки опухоли имеют большую иммуногенность для данной линии иммунокомпетентных мышей по сравнению с исходными, то сложно вычленить иммунную составляющую противоопухолевого действия цитотоксической терапии. Цель исследования - получение мышиных опухолевых клеточных линий 4Т1, стабильно экспрессирующих исходный красный флуоресцентный белок TagRFP и мутантный белок TagRFP-L228A, получение опухолевых моделей на их основе и оценка гуморального иммунного ответа мышей линии Balb/c на такие опухоли. Эукариотические плазмиды pcDNA3, содержащие гены, кодирующие экспрессию исходного белка TagRFP (TagRFP-WT) и белка с мутацией L228A (TagRFP-L228A), получали из прокариотических плазмид генно-инженерными методами. Индивидуальные клоны опухолевых клеток 4Т1, экспрессирующие TagRFP-WT и TagRFP-L228A, получали путем последовательной липосомальной трансфекции клеток эукариотическими плазмидами, селекции и клонирования. Опухолевые модели получали подкожной инокуляцией суспензии клеток 4Т1, 4Tl-TagRFP-WT и 4Tl-TagRFP-L228A самкам мышей Balb/c. Через 4 нед оценивали иммунный ответ на белок TagRFP методом иммуноферментного анализа по связыванию сывороток венозной крови мышей с исходным белком TagRFP-WT. В результате получены плазмиды для экспрессии белков TagRFP-WT и TagRFP-L228A в эукариотических клетках и клоны клеток 4Т1, стабильно экспрессирующие эти белки. После инокуляции клеток 4Tl-TagRFP-WT,4Tl-TagRFP-L228A и 4Т1 опухоли развились у всех мышей соответствующих групп. Методом иммуноферментного анализа на планшетах с адсорбированным белком TagRFP-WT показано наличие у мышей Balb/c с флуоресцирующими опухолями гуморального иммунного ответа на исходный флуоресцентный белок в отличие от такового у мышей с опухолями 4Т1. По сравнению с сыворотками мышей с опухолью 4Tl-TagRFP-WT связывание с исходным белком TagRFP-WT сывороток мышей с опухолями 4Tl-TagRFP-L228A уменьшается более чем в 4 раза. Заключение. Единственная аминокислотная замена L228A в белке TagRFP приводит к существенному уменьшению гуморального иммунного ответа на экспрессируемый опухолями белок TagRFP-L228A по сравнению с исходным TagRFP-WT. Это позволит использовать экспрессирующие TagRFP-L228A клеточные линии для создания оптимизированных опухолевых моделей для мышей Balb/c.

Авторы:

Издание: Российский биотерапевтический журнал
Год издания: 2025
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2025.-N 3.-С.36-44. Библ. 21 назв.
Просмотров: 0