ТРЕХПЕТЕЛЬНЫЕ ТОКСИНЫ ГАДЮК -КЛОНИРОВАНИЕ кДНК И ЭКСПРЕССИЯ B E. coli C ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ХИМЕРНОЙ (ГИБРИДНОЙ) КОНСТРУКЦИИ C БЕЛКОМ-ПАРТНЕРОМ SUMO

Аннотация:

Трехпетельные токсины (TПT) образуют одно из наиболее обширных семейств токсинов змеиных ядов. TПT характерны для большинства ядов аспид, но практически не встречаются в ядах гадюк. C использованием ядовитых желез гадюк Vipera nikolskii и V. berus был получен 21 клон кДНК, кодирующий эту группу токсинов. Из полученных последовательностей кДНК были выведены аминокислотные последовательности 9 T?T. Установленные последовательности имеют сигнальные пептиды, содержащие 19-21 аминокислотный остаток, за которыми следует зрелый белок, состоящий из 67 остатков. Bce T?T гадюк относятся к группе нетрадиционных (non-conventional) токсинов, а их последовательности содержат 9 остатков цистеина. TПT, кодируемый одним из транскриптов, был получен гетерологической экспрессией в клетках E. coli в виде гибридного белка с растительным белком-партнером SUMO с последующим отщеплением специфичной растительной протеазой Bd-SENPl и хроматографической очисткой. Структура полученного белка подтверждена методом масс-спектрометрии. Анализ его биологической активности показал, что этот токсин - слабый антагонист никотиновых холинорецепторов нейронного альфа7 и aльфа3бета2 подтипов. C использованием гибридного белка с SUMO мы также попытались получить TПT Aze-2 гадюки Azemiops feae, аминокислотная последовательность которого былаустановлена нами ранее в результате транскриптомного анализа ядовитой железы , а сам белок в минимальных количествах был идентифицирован в яде этой змеи. Однако токсин, точно соответствующий по массе Aze-2, с использованием этого подхода получить не удалось. Таким образом, в результате работы были установлены аминокислотные последовательности 9 TПT гадюк, один из которых был получен экспрессией гена в клетках E. coli и проявил способность взаимодействовать с никотиновыми холинорецепторами нейронного aльфа7 и aльфа3бета2 подтипов.

Авторы:

Издание: Биоорганическая химия
Год издания: 2025
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2025.-N 5.-С.831-843. Библ. 34 назв.
Просмотров: 1